[发明专利]一种新型冠状病毒检测方法

权利要求书

1.一种新型冠状病毒检测方法，其特征在于所述检测方法包括以下步骤：(1)抗体储备缓冲液置换为磁珠连接缓冲液；(2)磁珠的准备；(3)抗体标记生物素biotin；(4)标准品的配置；(5)上机分析。

2.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述(1)抗体储备缓冲液置换为磁珠连接缓冲液步骤为：

1)用超微量分光光度计分别测定MM05抗体和R001抗体的浓度，根据包被抗体要求的量100μg及测得的抗体浓度计算每个抗体需要的体积；

2)将所需体积的MM05抗体和R001抗体分别于过滤器中，分别加入磁珠连接缓冲液至450-550μl，并放入离心机，离心3-8min，弃掉底部液体，再重复以上的洗涤步骤两次，每次加400-500μl磁珠连接缓冲液，将过滤器倒置放入干净的离心管中，离心1-3min，收集液体；

3)再加入45-55μl磁珠连接缓冲液洗涤滤膜4-8次，将步骤2)中的过滤器倒置在离心管中，离心1-3min，收集液体；

4)取制得的R001抗体150μl体积，MM05抗体300μl体积放于冰上保存备用。

3.根据权利要求2所述的检测方法，其特征在于，所述(1)抗体储备缓冲液的置换为磁珠连接缓冲液步骤为：

1)用超微量分光光度计分别测定MM05抗体和R001抗体的浓度，根据包被抗体要求的量100μg及测得的抗体浓度计算每个抗体需要的体积；

2)将所需体积的MM05抗体和R001抗体分别于过滤器中，分别加入磁珠连接缓冲液至500μl，并放入离心机，离心5min，弃掉底部液体，再重复以上的洗涤步骤两次，每次加450μl磁珠连接缓冲液，将过滤器倒置放入干净的离心管中，离心2min，收集液体；

3)再加入50μl磁珠连接缓冲液洗涤滤膜6次，将步骤2)中的过滤器倒置在离心管中，离心2min，收集液体；

4)取制得的R001抗体150μl体积，MM05抗体300μl体积放于冰上保存备用。

4.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于所述(2)磁珠的准备步骤为：

1)磁珠的洗涤：取震荡30s以上的置换后磁珠贮备液0.13ml于离心管中，快速离心，吸弃上清液；再加入250-350μl磁珠清洗缓冲液，涡旋振荡3-8s，快速离心，吸弃上清液，再重复磁珠洗涤步骤两次，吸弃上清液，即得缓冲液洗涤后的磁珠；

2)磁珠的转换：加入250-350μl磁珠连接缓冲液于缓冲液洗涤后的磁珠中，涡旋振荡3-8s，快速离心，吸弃上清液，再重复磁珠置换步骤两次，快速离心，吸弃上清液，加入291μl磁珠连接缓冲液，涡旋振荡3-8s，快速离心并放置于冰上，即得缓冲液置换后的磁珠；

3)将预冷的1ml磁珠连接缓冲液加入含有10mg EDC的小瓶中，涡旋5-10s，取9μl加入缓冲液置换后的磁珠中，涡旋震荡混合8-12s，将离心管于2-8℃混合孵育25-35min，快速离心，吸弃上清，分别加入300μl置换后的抗体MM05溶液和150μl置换后的抗体R001溶液，涡旋振荡8-12s，将离心管于2-8℃混合孵育1.5-2.5h，快速离心，吸弃上清液，加入300μl磁珠清洗缓冲液，涡旋振荡3-8s，快速离心，吸弃上清液，再重复一次磁珠洗涤步骤，加入300μl磁珠封闭缓冲液，涡旋振荡3-8s，室温孵育40-50min，快速离心，吸弃上清液，加入300μl磁珠清洗缓冲液，涡旋振荡3-8s，快速离心，吸弃上清液，加入300μl磁珠稀释液，涡旋振荡3-8s，快速离心，即得偶联抗体的磁珠Beads-MM05溶液，放3-5℃下保存。