[发明专利]一种增强NK细胞毒作用的培养液及其制备方法

说明书

本发明涉及细胞生物学技术领域，具体涉及一种增强NK细胞毒作用的培养液及其制备方法。一种增强NK细胞毒作用的培养液，所述无血培养液包括IL‑18、IL‑13、IL‑19、IL‑27、IL‑23、PRDX1、DEF1和1640基础培养基，IL‑18在培养液中的终浓度为5000‑8000IU/Ml，IL‑13在培养液中的终浓度为3000‑5000UI/ML，IL‑19在培养液中的终浓度为5000‑6000UI/ML，IL‑27在培养液中的终浓度为5000‑6000UI/ML，IL‑23在培养液中的终浓度为5000‑6000UI/ML，PRDX1的浓度为50μg/L、DEF1的浓度为60μg/L。本发明提供增强NK细胞毒作用的培养液与普通NK细胞培养液相比可明显增强NK细胞毒性及活性，为NK细胞在免疫细胞治疗中提供了广泛的应用。

技术领域

本发明涉及细胞生物学技术领域，具体涉及一种增强NK细胞毒作用的培养液及其制备方法。

背景技术

NK细胞又称自然杀伤细胞(natural killer cell，NK细胞)，是机体内重要的免疫细胞，作为与T细胞、B细胞并列的一大类淋巴细胞群体，是天然免疫系统的重要成员，负责杀伤老化、受病毒感染、肿瘤等异常细胞。

肿瘤是困扰人类健康的重大疾病，但由于其高度的复杂性、多样性、可变性和异质性，一直找不到一种更加深入治疗方法，随着医学的进步，癌症的治愈率、生存率都有显著的改善，但现在仍然是难治性的疾病。NK细胞的靶细胞主要是肿瘤细胞、病毒感染细胞、某些自身组织细胞(如血细胞)及寄生虫等，因此NK细胞是机体抗肿瘤、抗感染免疫的重要组成部分。由于这些特点，NK细胞在细胞免疫治疗上有着广泛的应用前景。在体外被活化的NK细胞毒性较高，可用作免疫细胞的治疗制剂。人体体外及动物试验证实了其对各种癌症治疗的可能性：利用肿瘤细胞系的方法，确认其对血液系统肿瘤(白血病和淋巴瘤等)、肝癌、肺癌、肾癌、神经系统肿瘤和皮肤癌等均具有体外细胞毒性，特别是对白血病和神经源性肿瘤已明确了其临床及非临床的治疗效果。2009年NK细胞治疗技术就已列入国家三类医疗技术目录。

充足的细胞数量和强烈的细胞毒性是细胞治疗疗效提升的关键因素。现有的细胞免疫治疗中的NK细胞主要是通过分离血液中的淋巴细胞，经体外培养、各种细胞因子刺激诱导扩增培养，得到一定量的细胞后回输人体，进行肿瘤治疗。现有NK细胞的培养基主要是由基础培养基、动物血清和各种因子培养组成，培养得到的NK细胞增殖倍数有限、数量不多，不能广泛的用于治疗，限制了NK细胞在免疫细胞治疗中的应用。目前急需一种细胞纯度高、扩增倍数大的NK细胞的的培养液及其培养方法。

发明内容

鉴于现有技术存在的问题，本发明的目的在于提供一种增强NK细胞毒作用的培养液及其制备方法。本发明提供的培养液与普通NK细胞培养液相比可明显增强NK细胞毒性及活性。

为实现上述发明目的，本发明采用以下技术方案。

一种增强NK细胞毒作用的培养液，所述无血培养液包括IL-18、IL-13、IL-19、IL-27、IL-23、PRDX1、DEF1和1640基础培养基，IL-18在培养液中的终浓度为5000-8000IU/Ml，IL-13在培养液中的终浓度为3000-5000UI/ML，IL-19在培养液中的终浓度为5000-6000UI/ML，IL-27在培养液中的终浓度为5000-6000UI/ML，IL-23在培养液中的终浓度为5000-6000UI/ML，PRDX1的浓度为50μg/L、DEF1的浓度为60μg/L。

所述的增强NK细胞毒作用的培养液的制备方法具体包括以下制备方法。

步骤1、基础培养基的制备。

1)溶解培养基：将干粉培养基10.4g溶于总量1/3的水中，再用水洗包装袋内面两次，倒入培养液中，振荡或超声助溶，一般不要加热助溶。

2)补加试剂：根据基础培养基说明和试验需要加入NaHCO₃、谷氨酰胺。