[发明专利]一种增强NK细胞毒作用的培养液及其制备方法

权利要求书

1.一种增强NK细胞毒作用的培养液，其特征在于，所述无血培养液包括IL-18、IL-13、IL-19、IL-27、IL-23、PRDX1、DEF1和1640基础培养基，IL-18的浓度为5000-8000IU/Ml，IL-13的浓度为3000-5000UI/ML，IL-19在培养液中的浓度为5000-6000UI/ML，IL-27的浓度为5000-6000UI/ML，IL-23的浓度为5000-6000UI/ML，PRDX1的浓度为50μg/L、DEF1的浓度为60μg/L。

2.如权利要求1所述的增强NK细胞毒作用的培养液的制备方法，其特征在于，包括以下制备方法：

步骤1、基础培养基的制备：

1) 溶解培养基：将干粉培养基10.4g溶于总量1/3的水中，再用水洗包装袋内面两次，倒入培养液中，振荡或超声助溶；

2）补加试剂：加入NaHCO₃、谷氨酰胺；

3) 加抗生素：一般抗生素终浓度为：青霉素100U/ml，链霉素100U/ml；青霉素为80万U/瓶，溶于4ml体积，每一升培养液中加0.5ml即可；链霉素为100万U/瓶，溶于5ml体积，每一升培养液中也加0.5ml即可；无链霉素时，用庆大霉素代替，浓度为50～200U/ml；

4) 调pH值：加水到800 800-1000ml，用5% NaHCO₃调节pH到7.2；

5) 过滤除菌：用0.45um和0.22um滤膜各一张，上层为0.45um，下层为0.22um，以保证过滤效果，滤膜正面朝上；过滤后分装于100或200ml小瓶中，所得溶液为基础培养基；

步骤2、加小牛血清：根据培养基配制的量加入小牛血清分装，-20℃冷冻保存；

步骤3、在配制好的基础培养基中加入IL-18、IL-13、IL-19、IL-27、IL-23、PRDX1、DEF1，混匀后即可备用。

3.如权利要求1所述的增强NK细胞毒作用的培养液的制备方法，其特征在于，所述的水为新制备的三蒸水，在试验前当天或前一天制备。

4.如权利要求1所述的增强NK细胞毒作用的培养液的制备方法，其特征在于，加入小牛血清的体积分数为10%~20%，临用前加入。