[发明专利]一种心血管疾病诊断用miRNA标志物及其应用

说明书

一种心血管疾病诊断用miRNA标志物及其应用，（1）100μmol/l Hcy干预内皮细胞建立凋亡模型，并且细胞活力染色及流式细胞术检测该浓度Hcy可以致内皮细胞凋亡，为后续实验奠定基础；（2）步骤（1）后，RT‑qPCR检测miR‑491‑5p表达水平；确定miR‑491‑5p在Hcy致内皮细胞凋亡中发挥作用；（3）转染miR‑491‑5p mimics及miR‑491‑5p inhibitor后，RT‑qPCR检测miR‑491‑5p表达水平；确定转染miR‑491‑5p mimics、miR‑491‑5p inhibitor成功后，为反向验证miR‑491‑5p对Hcy致内皮细胞凋亡的作用奠定基础；（4）分别转染miR‑491‑5p mimics及miR‑491‑5p inhibitor，流式细胞术再次检测细胞凋亡情况，明确miR‑491‑5p在Hcy致内皮细胞凋亡中作用。本发明涉及miR‑491‑5p在Hcy致内皮细胞损伤中具有重要作用，为以后在分子水平检测并诊断动脉粥样硬化提供理论依据，具有潜在的实用价值。

技术领域

本发明属于医学技术领域，特别涉及一种心血管疾病诊断用miRNA标志物及其应用。

背景技术

心血管疾病(cardiovascular disease，CVD)是全球发病率和死亡率最高的疾病。目前我国心血管疾病患病人数为2.9亿，死亡率位居所有疾病首位，占居民疾病死亡构成的40％以上。CVD的发病机制尚不完全清楚，它的危险因素主要包括高血压、糖尿病、缺氧、高龄等，寻找心血管病发生和发展的分子机制成为了国内外研究和关注的热点。而大多数心血管疾病与动脉粥样硬化(Atherosclerosis，AS)的发展有关，近年来，随着人们生活水平的提高、饮食习惯的改变、工作压力的增加以及社会环境的变迁等因素影响，AS发病率呈明显上升的趋势，且发病年龄日趋年青化，因而早期发现、预防和控制动脉粥样硬化的发生和发展是目前临床科学的重要目标之一。但AS的早期分子诊断、机制及方法尚未完全阐明。目前，对于动脉粥样硬化的治疗大多还是药物治疗，常见药物有阿司匹林、氯吡格雷等，但药物副作用较大，造成过敏反应、肝损害、肾损害、胃肠道反应、血液系统毒性等，适用人群少，不能广泛普及；而作为检测血管病变金标准的颈动脉超声及血管造影，仅仅对已经发生了动脉结构改变的动脉粥样硬化有诊断意义，很难直接观察到尚未发生结构改变的动脉粥样硬化的病变；而且血管造影具有创伤性，尤其是那些对造影剂过敏、肾脏功能不好的患者无法适用。因此，寻找一种动脉粥样硬化发生发展的早期分子诊断标志物将对动脉粥样硬化的预防和诊断有着重要的意义。

AS斑块好发于异常血流形态区域，如血管弯曲和血管分支处，层流区域很少发生AS病变。而内皮细胞位于血管最内层，内侧直接与血流接触，外侧与细胞外基质连接，与细胞外基质共同构成了内皮细胞屏障，其屏障功能的完整性对维持血管系统稳态密切相关。内皮屏障功能的紊乱导致炎症细胞的入侵和血管壁脂质沉积，而这正是动脉粥样硬化发生发展的关键进程。因此动脉血管内皮细胞完整的结构及功能，能阻止血液中各种有害物质向内膜下的迁徙、移位、聚集，为防止造成动脉粥样硬化相关病变提供必要保障。细胞凋亡是机体的一种基本生物学现象，在多细胞生物去除不需要的或异常的细胞中起着必要的作用。细胞凋亡是内皮细胞损伤的关键机制，因此了解内皮细胞凋亡的作用机制对于研究心血管疾病，尤其是动脉粥样硬化显得尤为重要。