[发明专利]一种杜仲叶及其提取物HPLC特征图谱建立方法

说明书

本发明公开了一种杜仲叶及其提取物HPLC特征图谱建立方法及其指纹图谱，该方法包括：步骤1供试品溶液的制备；步骤2对照品溶液的制备；步骤3色谱条件：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；流动相A为乙腈，流动相B为0.1％磷酸溶液，进行梯度洗脱；检测波长206nm；柱温：10‑30℃；流速：1.0ml.min^‑1；进样量：10μl；步骤4测定，得到紫灯片的指纹图谱。本发明还对该指纹图谱的建立方法进行了方法学验证。本发明测定的杜仲叶及其提取物特征图谱，精密度高，稳定性好，重复性好，能够有效地控制杜仲叶及其提取物的质量，确保杜仲叶、提取物及其相关产品质量的均一稳定、安全有效。

技术领域

本发明涉及中药材及其提取物质量控制方法，具体涉及一种用高效液相色谱法对杜仲叶及其提取物特征图谱的建立方法，以及由此方法得到的杜仲叶及其提取物特征图谱。

背景技术

杜仲叶为杜仲科植物杜仲的干燥叶，为《中国药典》标准收载。主要活性成分包括黄酮类、环烯醚萜类、苯丙素类、木脂素类、多糖类，杜仲叶微辛、温，归肝、肾经，具有补肝肾、强筋骨、降血压的功效，主治肝肾不足，腰膝酸软，筋骨痿弱等症。杜仲叶中含有丰富的营养物质，包括VB1、VE、β-胡萝卜素，17种游离氨基酸，锗、硒等15种微量元素。杜仲叶中的粗蛋白质含量高于玉米、谷、高粱和薯类，与大麦、小麦等相当。杜仲叶中含有质量分数为1.59％的亚油酸和45.85％的亚麻酸这两种人体必需的脂肪酸。杜仲叶现在已被广泛应用于医药、功能饮料、保健食品、功能饲料等领域中，并且取得了良好的效果。

中药特征图谱是指中药经适当处理后，采用一定的分析手段，得到的能够标识其中各种组分群特征的共有峰的图谱，是一种新的中药质量控制模式。中药特征图谱可全面反映中药所含有内在化学成分的种类，进而反映中药的质量，尤其是在现阶段中药的有效成分绝大多数没有明确，采用中药特征图谱的方式，将有效地表征中药质量。中药特征图谱在中药材及其提取物和制剂的整体质量控制方面的优势已获得业界人士的广泛认可，国际上也多采用特征图谱对植物药及其产品进行质量控制。

建立杜仲叶及其提取物的特征图谱，对于杜仲叶药材的产品开发、质量控制，以及用药安全将具有重要意义。

目前，以特征图谱控制杜仲叶及其提取物的质量，尚未见文献报道。

发明内容

本发明的目的是提供一种杜仲叶及其提取物HPLC特征图谱的建立方法。其步骤是将杜仲叶及其提取物制备成供试品溶液，经高效液相色谱法对杜仲叶及其提取物进行分析检测，获得杜仲叶及其提取物HPLC特征图谱，从而为杜仲叶及其提取物的内在质量评价提供有力支撑依据。

本发明提供了一种杜仲叶HPLC特征图谱的建立方法，包括以下步骤：

步骤1、供试品溶液的制备：精密称取样品粉末0.1-0.5g，置具塞锥形瓶中，精密加入20-100％甲醇25-100ml，称重，超声处理0.2-1小时，取出，放冷，再称定重量，用20-100％甲醇补足减失的重量，用微孔滤膜滤过，取续滤液，得供试品溶液；

步骤2、对照品溶液的制备：取绿原酸对照品5-15mg，分别置50ml容量瓶中，加甲醇定容至刻度，摇匀，用微孔滤膜滤过，取续滤液，即得对照品溶液；

步骤3、色谱条件：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；流动相A为乙腈，流动相B为0.1％磷酸溶液，进行梯度洗脱；检测波长206nm；柱温：10-30℃；流速：1.0ml.min^-1；进样量：10μl；

前述方法的梯度洗脱程序的体积比浓度为：

洗脱时间 流动相A的比例 流动相B的比例

0～28min 5→12 95→88