[发明专利]一种杜仲叶及其提取物HPLC特征图谱建立方法

权利要求书

1.一种杜仲叶及其提取物的HPLC特征图谱检测方法，其特征在于，包括以下步骤：

步骤1、供试品溶液的制备：

精密称取样品粉末0.1-0.5g，置具塞锥形瓶中，精密加入20-100％甲醇25-100ml，称重，超声处理0.2-1小时，取出，放冷，再称定重量，用20-100％甲醇补足减失的重量，用微孔滤膜滤过，取续滤液，得供试品溶液；

步骤2、对照品溶液制备：

取绿原酸对照品5～15mg，分别置50ml容量瓶中，加甲醇定容至刻度，摇匀，用微孔滤膜滤过，取续滤液，即得对照品溶液；

步骤3、色谱条件：

以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；流动相A为乙腈，流动相B为0.1％磷酸溶液，进行梯度洗脱；检测波长206nm；柱温：10-30℃；流速：1.0ml.min^-1；进样量：10μl；

步骤4、测定：

精密吸取供试品溶液10-20μl注入液相色谱仪，照高效液相色谱法测定，得到杜仲叶及其提取物的特征图谱。

2.按照权利要求1所述杜仲叶及其提取物的HPLC指纹图谱的检测方法，其特征在于：

步骤1、供试品溶液制备：

精密称取样品粉末0.5g，置具塞锥形瓶中，精密加入50％甲醇50ml，称重，超声处理40分钟，取出，放冷，再称定重量，用50％甲醇补足减失的重量，用微孔滤膜滤过，取续滤液，即得供试品溶液；

步骤2、对照品溶液制备：

取绿原酸对照品，置50ml容量瓶中，加甲醇制成每1ml含有绿原酸50μg的溶液，即得对照品溶液；

步骤3、色谱条件：

以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈为流动相A，0.1％磷酸为流动相B，按下表进行梯度洗脱；检测波长：206nm；柱温：25℃；流速：1.0ml.min^-1；

步骤4、测定：

精密吸取供试品溶液10μl注入液相色谱仪，照高效液相色谱法测定，得到杜仲叶及其提取物的特征图谱。

3.按照权利要求2所述杜仲叶及其提取物特征图谱的研究方法，其特征在于：供试品特征图谱中有7个特征峰，与参照物绿原酸峰相对应的峰为S峰，计算各特征峰与S峰的相对保留时间，其相对保留时间应在规定值的±5％之内；规定值为0.25(峰1)、0.44(峰2)、1.00(峰S)、1.92(峰3)、2.11(峰4)、2.19(峰5)、2.37(峰6)；其中峰1为桃叶珊瑚苷、峰2为京尼平苷酸、峰S为绿原酸、峰4为芦丁、峰5为异槲皮苷。