[发明专利]通用型嵌合抗原受体修饰的T细胞及其制备方法和应用

说明书

本发明涉及生物技术领域，具体涉及通用型嵌合抗原受体修饰的T细胞及其制备方法和应用。通用型嵌合抗原受体修饰的T细胞，其中，所述T细胞来源于人或动物的脐血。本发明提供的通用型CAR‑T可以使得细胞疗法的适用性扩展到一类人群，而不仅仅局限于单个个体，从而能够实现工业化大规模生产。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，具体涉及通用型嵌合抗原受体修饰的T细胞及其制备方法和应用。

背景技术

近十余年来，随着肿瘤免疫学理论和临床技术的发展，肿瘤免疫治疗逐步发展成为国际公认的肿瘤综合治疗第四大模式。美国《科学》杂志更是将肿瘤免疫治疗列位2013年度突破性研究进展第一位，认为其是肿瘤治疗的重大转折点。其中，具有高效特异性、杀伤活性和持久性的嵌合抗原受体修饰的T细胞(Chimeric Antigen Receptor T cells，CAR-T)疗法受到广泛关注，成为目前最前沿、最有发展前景的肿瘤免疫疗法之一。

CAR-T细胞治疗是将人工改造的外源性嵌合抗原受体基因导入T细胞内进行基因修饰后，经过纯化、体外规模化扩增和活化，回输给患者进行治疗的方法。CAR-T细胞疗法通过外源基因转染技术，把识别肿瘤相关抗原的单链抗体(Single chain fragmentvariable，scFv)和T细胞活化序列的融合蛋白表达到T细胞表面，使可以特异识别肿瘤相关抗原的scFv通过跨膜区与T细胞胞内的活化增殖信号域偶联。表达CAR的T细胞以抗原依赖、但非MHC限制的方式结合肿瘤抗原，启动并活化特异性杀伤肿瘤反应。目前，CAR-T细胞疗法在血液肿瘤的治疗中取得了良好的疗效，在实体瘤的治疗方面仍处于研究阶段。且目前采用的方法多是自体过继细胞治疗(autologous adoptive cell transfer，ACT)，这种方法昂贵并且耗时。对于一部分患者，很难获得足量且状态良好的淋巴细胞用于CAR-T细胞治疗。因此，如果制备通用型的CAR-T可能使得细胞疗法的适用性扩展到一类人群，而不仅仅局限于单个个体，从而能够实现工业化大规模生产。

脐带血是胎儿娩出后残留在脐带和胎盘中的血液。脐带血中淋巴细胞相对不成熟，抗原性较弱。研究表明，脐带血来源的T细胞仅能产生少量的细胞因子，且生物活性较低；与成人外周血T细胞相比，脐带血T细胞产生IL-2水平低于成人外周血，IL-2是活化T细胞分泌的细胞因子，脐带血中低水平的IL-2使其介导的T细胞活化效应降低，依赖淋巴细胞的免疫排斥反应也随之减轻。另外脐带血是废弃的血源，对供体没有负担，来源广泛，易于收集和保存；将有望成为通用型肿瘤治疗产品。

通过从脐带血中提取T细胞进行CAR修饰，获得通用型CAR-T，目前尚未有研究报道。

发明内容

本发明的目的在于提供一种通用型嵌合抗原受体修饰的T细胞(CAR-T)。

本发明的再一目的在于提供上述CAR-T细胞的制备方法。

本发明的再一目的在于提供上述CAR-T细胞的应用。

根据本发明具体实施方式的通用型嵌合抗原受体修饰的T细胞，所述T细胞来源于人或动物的脐血。

根据本发明具体实施方式的通用型嵌合抗原受体修饰的T细胞，所述T细胞通过对人或动物的脐血进行梯度密度离心、流式分选或免疫磁珠分选方法分离得到。

根据本发明具体实施方式的通用型嵌合抗原受体修饰的T细胞，所述嵌合抗原受体由CD8α信号肽、间皮素(mesothelin)scFv、人CD8α铰链区、人CD8α跨膜区、4-1BB胞内信号区和免疫受体络氨酸活化基序CD3ζ依次拼接构成。

根据本发明具体实施方式的通用型嵌合抗原受体修饰的T细胞，所述嵌合抗原受体的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。

SEQ ID NO.1：