[发明专利]一种CAR-T细胞灌流培养方法

权利要求书

1.一种CAR-T细胞灌流培养方法，其包括以下步骤：

1）从受试者单采血细胞中分离获得外周血单个核细胞，然后从外周血单个核细胞中分选获得T细胞；

2）将分离的T细胞用CD3/CD28刺激磁珠进行激活处理；

3）采用慢病毒载体感染激活后的T细胞；

4）对慢病毒感染后的T细胞进行灌流培养，收获CAR-T细胞；

其中使用不含动物源成分的无血清培养基对CAR-T细胞进行培养，所述不含动物源成分的无血清培养基的组成为：AIM-V+(3~9)%ISR，所述ISR为免疫细胞血清替代物；

所述灌流培养包括：

（1）当细胞密度为(0.5~1.1)×10⁶个细胞/mL时，灌流速率为0.4个生物反应器体积/天；当细胞密度≥2×10⁶个细胞/mL时，灌流速率为1.0个生物反应器体积/天；

或者（2）当细胞密度在(1.1~2)×10⁶个细胞/mL时，灌流速率为0.8个生物反应器体积/天；当细胞密度≥2×10⁶个细胞/mL时，灌流速率为1.0个生物反应器体积/天；

或者（3）当细胞密度为(0.5~1.1)×10⁶个细胞/mL时，灌流速率为0.4个生物反应器体积/天；当细胞密度在(1.1~2)×10⁶个细胞/mL时，灌流速率为0.8个生物反应器体积/天；当细胞密度≥2×10⁶个细胞/mL时，灌流速率为1.0个生物反应器体积/天。

2.根据权利要求1所述的CAR-T细胞灌流培养方法，其中，所述不含动物源成分的无血清培养基的组成为：AIM-V+(4~7)%ISR。

3.根据权利要求2所述的CAR-T细胞灌流培养方法，其中，所述不含动物源成分的无血清培养基的组成为：AIM-V+5%ISR。

4.根据权利要求1所述的CAR-T细胞灌流培养方法，其中，在步骤4）中，当细胞密度≥预设值时，开始灌流培养。

5.根据权利要求4所述的CAR-T细胞灌流培养方法，其中，所述预设值为(0.3~1.2)×10⁶个细胞/mL。

6.根据权利要求5所述的CAR-T细胞灌流培养方法，其中，所述预设值为(0.4~1.0)×10⁶个细胞/mL。

7.根据权利要求6所述的CAR-T细胞灌流培养方法，其中，所述预设值为0.5×10⁶个细胞/mL。

8.根据权利要求4所述的CAR-T细胞灌流培养方法，其中，在步骤4）中，在细胞密度达到预设值之前，采用补液培养，其中补液培养过程中以(0.3~1)×10⁶个细胞/mL的密度为补液标准进行补液，通气量为0.1L/分钟~1L/分钟，转速为4rpm-12rpm，通气为压缩空气加(1~10)%CO₂。

9.根据权利要求8所述的CAR-T细胞灌流培养方法，其中，在步骤4）中，在补液培养之前包括：

待感染后的T细胞数量达到(5~15)×10⁷个细胞，将感染后的T细胞转入Xuri生物反应器进行补液培养。

10.根据权利要求1所述的CAR-T细胞灌流培养方法，其中，灌流培养过程中的通气量为0.3L/分钟~0.8L/分钟，转速为5rpm~15rpm，通气为压缩空气加(1~10)%CO₂。

11.根据权利要求10所述的CAR-T细胞灌流培养方法，其中，灌流培养过程中的通气量为0.4L/分钟~0.6L/分钟，转速为8rpm~12rpm，通气为压缩空气加(3~6)%CO₂。