[发明专利]一种土壤和沉积物中天然雌激素的检测方法

说明书

本发明公开了一种土壤和沉积物中天然雌激素的检测方法，涉及环境检测领域中土壤和沉积物中天然雌激素类物质的检测方法领域，为解决行业内还未有土壤和沉积物中天然雌激素类物质的检测分析方法的问题。包括以下步骤：步骤一：将样品进行冷冻；步骤二：进行真空冷冻干燥；步骤三：进行超声萃取；步骤四：离心后收集萃取液；步骤五：进行超声萃取；步骤六：离心后收集萃取液，将两次超声萃取的萃取液合并；步骤七：萃取液水浴加热并进行氮吹浓缩定容；步骤八：进行提取；步骤九：使用正己烷进行柱活化，进行洗脱，氮吹仪吹干；步骤十：添加衍生化试剂，微波衍生化，定容；步骤十一：检查仪器性能；步骤十二：绘制标准溶液；步骤十三：测定结果。

技术领域

本发明涉及环境检测领域中土壤和沉积物中天然雌激素类物质的检测方法领域，具体为一种土壤和沉积物中天然雌激素类物质的检测方法。

背景技术

天然雌激素类物质主要存在各类养殖业中，根据不少调查发现，在养殖户进行养殖的过程中会使用雌激素类物质从而提高物种的繁殖和产量，但是雌激素对于人类的内分泌系统，代谢，生长发育有很大影响；含有雌激素的固体废物进入土壤和沉积物中很难被可以降解，属于持久性有机污染物的一种。近年来对于雌激素的检测技术比之前有较大提高，主要是电化学分析法，色谱法和免疫法等，对于雌激素的色谱法检测主要是液相色谱，气相色谱，气相色谱-质谱法，液相-质谱联用法；其中气相色谱-质谱法的检测需要将提取的样品衍生化后进行测定，结果准确且成本更低。

目前国家和环境监测行业内还未有明确的土壤和沉积物中天然雌激素类物质的检测分析方法。通过对某些养殖等重点行业调查过程中会出现无法进行场地调查和后期修复等问题。因此市场急需研制一种土壤和沉积物中天然雌激素类物质的检测方法来帮助人们解决现有的问题。

发明内容

本发明的目的在于提供一种土壤和沉积物中天然雌激素的检测方法，以解决上述背景技术中提出的国家和环境监测行业内还未有土壤和沉积物中天然雌激素类物质的检测分析方法的问题。

为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：一种土壤和沉积物中天然雌激素的检测方法，包括以下步骤：

步骤一：将采集的土壤和沉积物样品置于4℃冰箱中冷冻24小时；

步骤二：取出样品迅速进行真空冷冻干燥2小时；

步骤三：称取1.0±0.1g样品置于10ml离心管中，添加内标溶液，内标物为17β-雌二醇-D3，添加浓度为50ng/kg，添加5.0ml二氯甲烷和甲醇混合液进行超声萃取25min；

步骤四：离心后收集萃取液；

步骤五：添加2.0ml二氯甲烷和甲醇混合液进行超声萃取25min；

步骤六：离心后收集萃取液，将两次超声萃取的萃取液合并；

步骤七：萃取液在45℃水浴加热并进行氮吹浓缩至0.5ml,用正己烷定容至1ml；

步骤八：使用正相的silica固相萃取柱进行提取；

步骤九：使用正己烷进行柱活化，使用5ml乙腈进行洗脱，氮吹仪吹干；

步骤十：添加100ul的衍生化试剂，微波衍生化2min，用乙腈定容至1ml；

步骤十一：用十氟三苯基膦检查气相色谱-质谱仪仪器性能满足相关性能指标；

步骤十二：配置天然雌激素类物质标准曲线绘制标准溶液；

步骤十三：将提取液注入气相色谱-质谱分析仪，目标分析物经气相色谱分离，质谱检测，根据保留时间、碎片离子质荷比及其丰度定性，内标法定量，根据建立的标准曲线得出提取液中目标物分析物浓度，计算出样品中目标分析物的测定结果。

优选的，所述步骤一中可以将新鲜的土壤或者沉积物样品首先进行分装在50ml塑封袋中，进行冷冻24h，将样品中的水分转化为冰，使得样品在下一步真空冷冻干燥时，能够更快速实现样品脱水。

优选的，所述步骤三中二氯甲烷和甲醇提取剂为二氯甲烷和甲醇按体积比2:1的比例混合，萃取温度为45℃。