[发明专利]一种土壤和沉积物中天然雌激素的检测方法

权利要求书

1.一种土壤和沉积物中天然雌激素的检测方法，其特征在于，包括以下步骤：

步骤一：将采集的土壤和沉积物样品置于4℃冰箱中冷冻24小时；

步骤二：取出样品迅速进行真空冷冻干燥2小时；

步骤三：称取1.0±0.1g样品置于10ml离心管中，添加内标溶液，内标物为17β-雌二醇-D3，添加浓度为50ng/kg，添加5.0ml二氯甲烷和甲醇混合液进行超声萃取25min；

步骤四：离心后收集萃取液；

步骤五：添加2.0ml二氯甲烷和甲醇混合液进行超声萃取25min；

步骤六：离心后收集萃取液，将两次超声萃取的萃取液合并；

步骤七：萃取液在45℃水浴加热并进行氮吹浓缩至0.5ml,用正己烷定容至1ml；

步骤八：使用正相的silica固相萃取柱进行提取；

步骤九：使用正己烷进行柱活化，使用5ml乙腈进行洗脱，氮吹仪吹干；

步骤十：添加100ul的衍生化试剂，微波衍生化2min，用乙腈定容至1ml；

步骤十一：用十氟三苯基膦检查气相色谱-质谱仪仪器性能满足相关性能指标；

步骤十二：配置天然雌激素类物质标准曲线绘制标准溶液；

步骤十三：将提取液注入气相色谱-质谱分析仪，目标分析物经气相色谱分离，质谱检测，根据保留时间、碎片离子质荷比及其丰度定性，内标法定量，根据建立的标准曲线得出提取液中目标物分析物浓度，计算出样品中目标分析物的测定结果。

2.根据权利要求1所述的一种土壤和沉积物中天然雌激素的检测方法，其特征在于，所述步骤一中可以将新鲜的土壤或者沉积物样品首先进行分装在50ml塑封袋中，进行冷冻24h，将样品中的水分转化为冰，使得样品在下一步真空冷冻干燥时，能够更快速实现样品脱水。

3.根据权利要求1所述的一种土壤和沉积物中天然雌激素的检测方法，其特征在于，所述步骤三中二氯甲烷和甲醇提取剂为二氯甲烷和甲醇按体积比2:1的比例混合，萃取温度为45℃。

4.根据权利要求1所述的一种土壤和沉积物中天然雌激素的检测方法，其特征在于，所述步骤四中准备干净的带刻度线的10ml试管收集萃取液。

5.根据权利要求1所述的一种土壤和沉积物中天然雌激素的检测方法，其特征在于，所述步骤五中二氯甲烷和甲醇提取剂为二氯甲烷和甲醇按体积比2:1的比例混合。

6.根据权利要求1所述的一种土壤和沉积物中天然雌激素的检测方法，其特征在于，所述步骤八中首先用5.0ml的正己烷活化silica的固相萃取柱，然后添加1ml的样品，不让萃取柱流干。

7.根据权利要求1所述的一种土壤和沉积物中天然雌激素的检测方法，其特征在于，所述步骤九中，随后加入15.0ml正己烷进行冲洗，冲洗结束后，使用真空泵将固相萃取柱抽干，随后添加5.0ml乙腈作为洗脱液进行洗脱，并收集至试管管中，使用氮吹仪吹干。

8.根据权利要求1所述的一种土壤和沉积物中天然雌激素的检测方法，其特征在于，所述步骤十中衍生化试剂为N-甲基三甲基硅基三氟乙酰胺MSTFA和三甲基碘硅烷混合物，按其体积比500:1混合得到，用乙腈定容至1ml并转移到2ml样品瓶进行待测。

9.根据权利要求1所述的一种土壤和沉积物中天然雌激素的检测方法，其特征在于，所述步骤十一中通过气相色谱进样口直接注入1.0μl浓度为50μg/ml十氟三苯基膦，运行方法，得到十氟三苯基膦质谱图，其质量碎片的离子丰度应全部符合要求，否则须清洗质谱仪离子源。

10.根据权利要求1所述的一种土壤和沉积物中天然雌激素的检测方法，其特征在于，所述步骤十二中天然雌激素物质是指雌酮，雌二醇和雌三醇，所用配置标准溶液的溶剂为二氯甲烷。