[发明专利]一种研究CXCR3介导的TLRs/MyD88信号通路在促进乙肝肝硬化癌变的方法

说明书

本发明提供一种研究CXCR3介导的TLRs/MyD88信号通路在促进乙肝肝硬化癌变的方法，步骤三：从感染了慢病毒的LX‑2细胞中提取出RNA和蛋白质，以进行PCR验证和WB验证；步骤四：用CXCR3干扰剂转染HBV慢病毒感染的LX‑2细胞，并从CXCR3干扰剂转染的LX‑2细胞中提取出RNA和蛋白质，以进行qPCR验证和WB验证。本发明通过体外培养过表达HBV的肝星状细胞株HBV‑LX‑2，同时瞬时干扰CXCR3的表达，来探究CXCR3是否参与调控TLRs/MyD88信号通路上基因的表达，是否对肝星状细胞增殖、迁移和凋亡是否有影响，从而来推断CXCR3和TLRs/MyD88信号通路在肝硬化癌变中的作用。研究发现干扰CXCR3可以下调TLRs/MyD88信号通路上的基因表达，抑制HBV‑LX‑2的生理活动。

技术领域

本发明属于医疗技术领域，尤其是涉及一种CXCR3介导的TLRs/MyD88信号通路在促进乙肝肝硬化癌变的方法。

背景技术

根据世界卫生组织统计，2015年，全球估计有2.57亿人患慢性乙型肝炎，慢性乙型肝炎病毒(HBV，HepatitisBvirus)的感染会导致肝硬化和肝癌[1,2,3]，全球约有134万人死于肝病，其中患肝硬化死亡的有74万人^[3]。HBV主要引起慢性肝病，可以在患者体内持续几十年的慢性感染，导致肝脏炎症病变。HBV 并非直接导致肝细胞病变，而是通过宿主的免疫和炎症反应来导致肝炎和肝癌的发生。肝癌发展的过程中，趋化因子及其受体扮演着重要的角色，趋化因子受体 CXCR3，属于趋化因子受体的CXC亚家族^[4]，在结肠癌，黑素瘤，B淋巴瘤和乳腺癌等癌细胞中高表达。它与配体趋化因子CXCL9的特异性结合后促进癌细胞迁移和侵袭^[5]。CXCR3可以增强磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)和下游Akt的活性，进而来调节细胞的增殖、凋亡和迁移等活动^[6]，CXCR3可以在多种细胞中表达，如Th1T细胞，CD8 T细胞，NKT细胞，NK细胞，树突状细胞和某些癌细胞^[7-9]，CXCR3在干扰素诱导后迅速上调，并促进T细胞，如CD4+T和CD8+T 细胞迁移至炎症组织^[10,11]。CXCR3在T细胞上的表达调节其抗肿瘤反应，而在肿瘤细胞上的表达促进癌症转移的反应^[12,13]。天然免疫和适应性免疫在乙型肝炎病毒急、慢性感染及其致病中起着重要的作用。Toll样受体 (Toll-likereceptors,TLRs)是天然免疫识别受体中的一种，可以通过识别细菌和真菌的细胞壁成分来抵制微生物感染，并产生相应的免疫应答反应^[14-16]，髓样分化因子88(myeloiddifferentiationprimary-responseprotein88,MyD88)是除了TLR3， TLRs共用的衔接蛋白，MyD88中含有TIR结构域的衔接蛋白 (TIRdomain-containingadaptorprotein,TIRAP)，TLR4能够激活TIRAP/MyD88信号传导途径，通过NF-κB和激活蛋白1(AP1)，激活促炎细胞因子IL-6，IL-10， IL-12和TNF-α的产生^[17,18]，这种TLR促进炎症因子的反应同样在肝细胞中存在，并且IL-6和TNF-α对肝细胞中HBV的复制有抑制作用^[19,20]。在MyD88信号传导途径中，HBV作为一种异物被识别^[21-22]。胞质中的嗜中性白细胞碱性磷酸酶3(neutrophilicalkalinephosphatase3,NALP3)复合体被激活，并促进炎性因子IL-1β分泌，IL-1β的异常分泌能够使机体产生或者加重炎症反应。成熟的IL-1 β与细胞上IL-1β受体结合，并促使接头蛋白分子MyD88的再次激活^[23-24]。趋化因子受体CXCR3和TLRs/MyD88信号通路在诱导乙型肝炎向癌症发展中有着重要的作用，在以往的研究中，主要是研究CXCR3或TLRs等各自在癌症中的作用，而两者之间的调控关系对于肝癌的发展研究较少。

发明内容