[发明专利]一种α-1,3-岩藻糖基转移酶突变体及利用该突变体制备3-岩藻糖基乳糖的应用

权利要求书

1.一种α-1,3-岩藻糖基转移酶突变体，其特征在于，所述α-1,3-岩藻糖基转移酶突变体以SEQ ID NO:4为基础，在SEQ ID NO:4的46、128、129、132位上同时发生组合突变；

其中，组合突变选择如下任一组合：

1）第46位由丝氨酸突变为苯丙氨酸、第128位由丙氨酸突变为天冬酰胺、第129位由组氨酸突变为天冬氨酸和第132位由酪氨酸突变为异亮氨酸；

2）第46位由丝氨酸突变为苯丙氨酸、第128位由丙氨酸突变为天冬酰胺、第129位由组氨酸突变为天冬氨酸和第132位由酪氨酸突变为色氨酸；

3）第46位由丝氨酸突变为苯丙氨酸、第128位由丙氨酸突变为天冬酰胺、第129位由组氨酸突变为天冬氨酸和第132位由酪氨酸突变为亮氨酸；

4）第46位由丝氨酸突变为亮氨酸、第128位由丙氨酸突变为天冬酰胺、第129位由组氨酸突变为天冬氨酸和第132位由酪氨酸突变为异亮氨酸；

5）第46位由丝氨酸突变为亮氨酸、第128位由丙氨酸突变为天冬酰胺、第129位由组氨酸突变为天冬氨酸和第132位由酪氨酸突变为色氨酸；

6）第46位由丝氨酸突变为亮氨酸、第128位由丙氨酸突变为天冬酰胺、第129位由组氨酸突变为天冬氨酸和第132位由酪氨酸突变为缬氨酸；

7）第46位由丝氨酸突变为亮氨酸、第128位由丙氨酸突变为天冬酰胺、第129位由组氨酸突变为天冬氨酸和第132位由酪氨酸突变为亮氨酸；

8）第46位由丝氨酸突变为苯丙氨酸、第128位由丙氨酸突变为天冬酰胺、第129位由组氨酸突变为谷氨酸和第132位由酪氨酸突变为异亮氨酸；

9）第46位由丝氨酸突变为苯丙氨酸、第128位由丙氨酸突变为天冬酰胺、第129位由组氨酸突变为谷氨酸和第132位由酪氨酸突变为色氨酸；

10）第46位由丝氨酸突变为苯丙氨酸、第128位由丙氨酸突变为天冬酰胺、第129位由组氨酸突变为谷氨酸和第132位由酪氨酸突变为缬氨酸；

11）第46位由丝氨酸突变为苯丙氨酸、第128位由丙氨酸突变为天冬酰胺、第129位由组氨酸突变为谷氨酸和第132位由酪氨酸突变为亮氨酸；

12）第46位由丝氨酸突变为亮氨酸、第128位由丙氨酸突变为天冬酰胺、第129位由组氨酸突变为谷氨酸和第132位由酪氨酸突变为异亮氨酸；

13）第46位由丝氨酸突变为亮氨酸、第128位由丙氨酸突变为天冬酰胺、第129位由组氨酸突变为谷氨酸和第132位由酪氨酸突变为色氨酸；

14）第46位由丝氨酸突变为亮氨酸、第128位由丙氨酸突变为天冬酰胺、第129位由组氨酸突变为谷氨酸和第132位由酪氨酸突变为缬氨酸；

15）第46位由丝氨酸突变为亮氨酸、第128位由丙氨酸突变为天冬酰胺、第129位由组氨酸突变为谷氨酸和第132位由酪氨酸突变为亮氨酸。

2.一种多核苷酸，其特征在于，所述多核苷酸编码如权利要求1所述的α-1,3-岩藻糖基转移酶突变体。

3.一种表达载体，其特征在于，所述表达载体包括如权利要求2所述的多核苷酸。

4.一种基因工程化的细胞，其特征在于，所述细胞包括如权利要求3所述的表达载体或如权利要求2所述的多核苷酸。

5.如权利要求4所述的细胞，其特征在于，所述细胞包括大肠杆菌。

6.如权利要求1所述的α-1,3-岩藻糖基转移酶突变体在制备3-岩藻糖基乳糖中的应用。

7.一种提高α-1,3-岩藻糖基转移酶催化活性的方法，其特征在于，在生物酶法催化体系中，使用如权利要求1所述的α-1,3-岩藻糖基转移酶突变体。