[发明专利]一种超临界过滤亲和吸附系统及其构建方法和超微因子制备方法及应用

权利要求书

1.一种用于制备超微因子的超临界过滤亲和吸附系统，其特征在于，所述系统包括第一储存罐，第一蠕动泵，超临界过滤装置，第二储存罐，第二蠕动泵以及亲和吸附装置；

其中，第一储存罐的出口经第一蠕动泵与超临界过滤装置的入口相连；超临界过滤装置的出口与储存罐入口相连；过滤后的液体出口与第二储存罐的第一入口相连；第二储存罐的出口经第二蠕动泵与亲和吸附系统相连；

亲和吸附装置的出口分别设有开关K2和开关K1，所述开关K2与第二储存罐的第二入口相连，所述开关K1与体系外相连。

2.根据权利要求1所述一种用于制备超微因子的超临界过滤亲和吸附系统，其特征在于，超临界过滤装置内置超临界过滤膜，膜孔径为1KD-10KD；亲和吸附装置内置亲和吸附膜。

3.一种应用超临界过滤亲和吸附系统制备超微因子的方法，其特征在于，所述方法包括：

步骤一，将样本溶液进行预处理；

步骤二，将预处理后的样本溶液进行外泌体的提取纯化，得到外泌体溶液和非外泌体溶液，将所得外泌体溶液进行破碎处理，得外泌体破碎溶液，将外泌体破碎溶液和非外泌体溶液混合后置于第一储存罐；

步骤三，第一储存罐的液体经第一蠕动泵过超临界过滤装置浓缩循环过滤后，小分子溶液进入第二储存罐内；

步骤四，打开开关K2，关闭开关K1，第二储存罐的液体经第二蠕动泵过亲和吸附装置，循环过滤至亲和过滤装置内亲和吸附膜饱和吸附后；关闭开关K2打开，打开开关K1，将第二储存罐的液体排出体系；

步骤五，关闭开关K1，打开开关K2，第二储存罐中加入洗脱液，经第二蠕动泵将洗脱液泵入亲和吸附装置，循环洗脱；即得超微因子溶液。

4.根据权利要求3所述一种应用超临界过滤亲和吸附系统制备超微因子的方法，其特征在于，所述超临界过滤装置内置超临界过滤膜，膜孔径为1KD-10KD；所述亲和吸附装置内置亲和吸附膜。

5.根据权利要求3所述一种应用超临界过滤亲和吸附系统制备超微因子的方法，其特征在于，所述样本溶液是来自植物、动物或人的体液和组织液，微生物培养液，植物、动物或人的体细胞、干细胞及经干细胞诱导分化的细胞的培养上清液。

6.根据权利要求3所述一种应用超临界过滤亲和吸附系统制备超微因子的方法，其特征在于，所述样本预处理的方法为将样本加入离心管中，5000-12000g，离心5-50min，取上清液，过0.22-0.45μm滤膜过滤除菌。

7.根据权利要求3所述一种应用超临界过滤亲和吸附系统制备超微因子的方法，其特征在于，所述的外泌体提取纯化的方法为超速离心法、密度梯度离心法、超滤法、聚合物沉淀法、切向流过滤法、双重切向流过滤法、免疫捕获法、亲和色谱法、微流控法或分子排阻法。

8.根据权利要求3所述一种应用超临界过滤亲和吸附系统制备超微因子的方法，其特征在于，所述外泌体溶液破碎处理的方法为超声法、挤出法、表面活性剂法或冻融法。

9.根据权利要求3所述一种应用超临界过滤亲和吸附系统制备超微因子的方法，其特征在于，所述的洗脱液包括：10-100mM KH₂PO₄、150-500mM NaCl和50-250mM MgCl₂。

10.一种权利要求3-9任一种所述一种应用超临界过滤亲和吸附系统制备超微因子的方法制备的超微因子，其特征在于，所述超微因子是由活细胞分泌的，分子量小于5KD的活性成分；所述超微因子应用于与超微因子相关的生物制品的制备中。