[发明专利]一种同时检测血液样品中多种抗风湿药物的方法、试剂盒及其应用

权利要求书

1.一种同时检测血液样品中多种抗风湿药物的方法，其特征在于，所述抗风湿药物包括阿司匹林、水杨酸和羟氯喹，所述方法包括：将待测血液样品进行前处理后进行HPLC-MS/MS检测。

2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述前处理过程包括：

向待测血液样品中加入含内标的0.5～2％(优选为1％)甲酸的甲醇或乙腈溶液，沉淀蛋白后过滤得上清液，以含0.05～0.2％(优选为0.1％)甲酸的10～30％(优选为20％，v/v)甲醇或乙腈水溶液稀释上清液，混匀后得上机样本。

3.如权利要求2所述的方法，其特征在于，所述待测血液样品、含内标的0.5～2％甲酸的甲醇或乙腈溶液和含0.05～0.2％甲酸的10～30％甲醇或乙腈水溶液的体积比为0.5～2:2～3:0.5～2，优选为1:3:1；

所述血液样品是血浆或血清，优选为血清；

所述沉淀蛋白采用蛋白沉淀板进行。

4.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述检测方法还包括以标准品制作标准曲线定量，同时采用低、中、高三个水平的质控品进行质控；

优选的，以标准品制作标准曲线定量具体方法包括：以标准溶液浓度为X轴，标准品峰面积为Y轴；进行线性回归分析得回归方程；将相应抗风湿药物峰面积代入标准曲线方程，分别计算待测血液样品中抗风湿药物的浓度；

优选的，质控品由活性炭净化的血液空白样本添加混合药物标准物质制得。

5.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述HPLC-MS/MS对待测样品进行检测具体方法为：

液相色谱条件包括：

采用梯度洗脱，流动相A相：含1～5％乙酸的水溶液，流动相B相：含1～5％乙酸的甲醇；

色谱柱为C18色谱柱；流动相流速为0.3～0.5ml/min(优选为0.4ml/min)；柱温为30～45℃(优选为40℃)；进样量1～10μL(优选为5μL)。

6.如权利要求5所述的方法，其特征在于，梯度洗脱方式具体流程为：0-0.5min，流动相B 0-5％；0.5-0.7min，流动相B 5-15％；0.7-3.0min，流动相B15-25％；3.0-3.1min，流动相B 25-98％；3.1-4.0min，流动相B98-98％；4.0-4.2min，流动相B98-5％；4.2-5min，流动相B5％-stop。

7.如权利要求5所述的方法，其特征在于，质谱条件包括：

离子源：电喷雾(ESI)；扫描方式：多反应监测(MRM)；喷雾电压正离子/负离子模式4000V，负离子模式2500V，离子传输管温度250℃，蒸发温度250℃，鞘气50arb，辅气310arb。

8.一种同时检测多种抗风湿药物的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括：阿司匹林、水杨酸和羟氯喹中的任意一种或多种标准品溶液；

含内标的0.5～2％(优选为1％)甲酸的甲醇或乙腈溶液；

含0.05～0.2％(优选为0.1％)甲酸的10～30％(优选为20％，v/v)甲醇或乙腈水溶液；

含1～5％乙酸的水溶液；

含1～5％乙酸的甲醇。

9.如权利要求8所述试剂盒，其特征在于，试剂为色谱纯试剂；

所述试剂盒还包括空白血清。

10.权利要求1-7任一项所述同时检测血液样品中多种抗风湿药物的方法和/或权利要求8或9所述试剂盒在抗风湿药物血药浓度监测中的应用。