[发明专利]两步抗体纯化方法

权利要求书

1.一种两步抗体纯化方法，其特征在于，包括：

a. 提供包含抗体的样品；

b. 经一次抗体捕集装置处理；

所述抗体捕集装置含有非蛋白A和蛋白A，所述非蛋白A具有以捕集目标抗体成分为主、并辅以分离其他杂蛋白的双功能效果；所述蛋白A用于捕集目标抗体成分；

c. 经一次精纯化装置处理，所述精纯化装置用于对从所述抗体捕集装置流出的含有抗体的馏分进行再纯化；

其中，所述抗体捕集装置和所述精纯化装置以全自动、半自动、或手动方式配合使用并组成抗体两步纯化系统；所述两步纯化系统总共用两根色谱柱实现两个分离单元；依据色谱双变量理论中各种蛋白在“停滞”和“迁移”之间的各组分的“临界置换剂浓度”不同，实施手工操作，在第一维和第二维进样时，始终保持置换剂浓度低于目标产品的“临界置换剂浓度”，以非连续地、多次进样方式完成第一，或第二维进样；

步骤b和c中，依据色谱双变量理论中各种蛋白在“停滞”和“迁移”之间的“临界置换剂浓度”不同，实施全自动多维色谱快速分离，或半自动的多维色谱的快速分离；在步骤b和c中，经处理后洗脱的条件为调整盐浓度、pH值、流速这三种变量中的至少一种；

所述色谱柱选自：整体柱及常规分析级或制备级色谱柱和色谱饼；所述抗体捕集装置具有在洗脱所述抗体的过程中除去杂蛋白的功能；所述抗体捕集装置和所述精纯化装置独立的选自刚性的硅胶基质、非刚性的聚合物基质上键合的各种配基；

对仿制药而言，该方法能够得到15毫克/毫升/小时的合格产品，其中天然成分的含量＞65%。

2.根据权利要求1所述的抗体纯化方法，其特征在于，所述抗体纯化方法满足如下条件（1）~（5）中的一个或多个：

（1）所述抗体捕集装置具有亲合色谱功能；

（2）所述抗体捕集装置具有阳离子交换性能；

（3）所述抗体捕集装置具有阴离子交换性能；

（4）所述抗体捕集装置具有疏水色谱性能；

（5）所述抗体捕集装置具有混合机理色谱性能。

3.根据权利要求1所述的两步抗体纯化方法，其特征在于，所述精纯化装置选自离子交换色谱、疏水相互作用色谱、尺寸排阻色谱、混合机理色谱柱，以及单柱二维色谱柱；其中所述离子交换色谱选自弱阳离子交换色谱、强阳离子交换色谱、弱阴离子交换色谱和强阴离子交换色谱。

4.根据权利要求1所述的两步抗体纯化方法，其特征在于，依据色谱双变量理论中各种蛋白在“停滞”和“迁移”之间的各组分的“临界置换剂浓度”不同，实施半自动操作，在第一维和第二维进样操作中一种为自动法，另一种为手动法。

5. 根据权利要求1所述的两步抗体纯化方法，其特征在于，在步骤b和c中色谱的流动相组成中阳离子种类为H⁺, K⁺, Na⁺或NH₄⁺中的至少一种，其范围为log[H⁺](pH) 从2~12，阳离子浓度可选为1 × 10^-3~5 × 10¹；在步骤b和c中色谱的流动相组成中阴离子种类为Cl^-, NO₃^-, SO₄^2-, PO₄^3-, HPO₄^2-, H₂PO₄^-中的至少一种；阴离子浓度范围可选为1 × 10^-3~5× 10¹；在步骤b和c中色谱的流动相组成中主要中性物质为尿素、饱和烃基或不饱和烃基或其烷基醇以及环链骨架结构中的至少一种；中性物质浓度范围选为1 × 10^-3~5 × 10¹。

6.根据权利要求1所述的两步抗体纯化方法，其特征在于，洗脱模式为所指的梯度洗脱条件是双变量。