[发明专利]一种维生素D3产量提高的酵母菌

权利要求书

1.一种维生素D3产量提高的酵母菌，其特征在于，其在酵母菌宿主中异源表达了3β-羟基甾醇-D24还原酶DHCR24基因，并过表达了乙酰乙酰辅酶A硫解酶ERG10、3-羟基-3-甲基戊二酰-CoA合酶ERG13、甲羟戊酸激酶ERG12、法尼基焦磷酸合酶ERG20、3-羟基-3-甲基戊二酰辅酶A还原酶tHMG1、异戊烯基焦磷酸异构酶IDI、磷酸甲羟戊酸激酶ERG8、甲羟戊酸焦磷酸脱羧酶ERG19、鲨烯环氧酶ERG1、甾醇14α-去甲基化酶ERG11、羊毛甾醇合酶ERG7和C-14甾醇还原酶ERG24基因。

2.根据权利要求1所述的酵母菌，其特征在于，所述的酵母菌中，还采用dCas9系统动态调控甾醇C-24甲基转移酶ERG6基因表达，具体是在酿酒酵母中导入以GAL1为启动子的dCas9蛋白基因片段和gRNA表达片段，所述的gRNA表达片段中含有ERG6基因启动子上的20nt位点。

3.根据权利要求2所述的酵母菌，其特征在于，所述的20nt位点的核苷酸序列如SEQ IDNO.2、SEQ ID NO.3、SEQ ID NO.4或SEQ ID NO.5所示。

4.根据权利要求2所述的酵母菌，其特征在于，所述的dCas9蛋白基因片段和gRNA表达片段导入到酵母菌的106a位点。

5.根据权利要求1所述的酵母菌，其特征在于，所述的GAL1启动子的核苷酸序列如SEQID NO.6所示。

6.根据权利要求1所述的酵母菌，其特征在于，所述的酵母菌为酿酒酵母、毕赤酵母或热带假丝酵母。

7.根据权利要求1所述的酵母菌，其特征在于，3β-羟基甾醇-D24还原酶DHCR24的编号为ID:424661，乙酰乙酰辅酶A硫解酶ERG10的编号为ID:856079、3-羟基-3-甲基戊二酰-CoA合酶ERG13的编号为ID:854913，甲羟戊酸激酶ERG12的编号为ID:855248，法尼基焦磷酸合酶ERG20的编号为ID：853272，3-羟基-3-甲基戊二酰辅酶A还原酶tHMG1的编号为ID:42650，异戊烯基焦磷酸异构酶IDI的编号为ID:855986，磷酸甲羟戊酸激酶ERG8的编号为ID:855260，甲羟戊酸焦磷酸脱羧酶ERG19的编号为ID:855779，鲨烯环氧酶ERG1的编号为ID:853086，甾醇14α-去甲基化酶ERG11的编号为ID:856398，羊毛甾醇合酶ERG7的编号为ID:856470，C-14甾醇还原酶ERG24基因的编号为ID:855441。

8.根据权利要求2所述的酵母菌，其特征在于，甾醇C-24甲基转移酶ERG6的编号为ID:855003。

9.权利要求1～8任一项所述的酵母菌在发酵生产维生素D3中的应用。

10.根据权利要求9所述的应用，其特征在于，所述的应用是将所述的酵母菌的种子液在YPD培养基中，在28～32℃、150～300rpm条件下培养。