[发明专利]一种氨基甲酸酯类农药的抗体的制备方法和应用

权利要求书

1.一种氨基甲酸酯类农药的抗体的制备方法，包括半抗原的制备方法和完全抗原的制备方法，其特征在于，所述半抗原的制备方法包括下列步骤：合成路线如(I)和(II)：

反应式(I)和(II)中的R为氨基甲酸酯类农药特征基团；所述完全抗原的制备方法中的制备的完全抗原(III)和(IV)，其结构式为

1)氨基甲酸酯类农药原料(R-OH)与对硝基酰氯溶解于二氯甲烷(DCM)和三

乙胺(Et3N)，持续搅拌反应，然后用乙酸乙酯萃取，用浓度为0.5M盐酸溶液调节PH值，萃取三次，弃去水层，乙酸乙酯层蒸发干燥得到

2)溶解于1，4-二氧六环，冰浴下滴加溶解在20mL饱和碳酸氢钠的氨基己酸，过滤后用盐酸调节pH至4-5，然后用乙酸乙酯萃取水层三次，乙酸乙酯蒸发干燥后得到粗产物，使用400目硅胶柱对粗产物纯化，初始流动相为乙酸乙酯：甲醇＝10：1，待对硝基苯酚等副产物完全流出后，用甲醇冲洗硅胶柱，将产物完全洗脱，于-20℃冷冻过夜后得到半抗原

3)氨基甲酸酯类农药原料(R-OH)溶解于DMF中，加入碳酸钾和2-溴乙酸乙酯或4-溴丁酸乙酯，在70℃中搅拌回流反应5h后加入乙酸乙酯和三级水萃取，移除水层；

4)乙酸乙酯层旋转蒸发后得中间产物，向中间产物加入氢氧化锂溶液，搅拌1h，然后加入乙酸乙酯萃取未水解完毕的中间体，弃乙酸乙酯层，萃取完毕后，用盐酸将水层pH调节至4-5，产物析出，有机相干燥后在石油醚中重结晶出半抗原

2.根据权利要求1所述的氨基甲酸酯类农药的抗体的制备方法，其特征在于：所述半抗原的制备方法中氨基甲酸酯类农药原料(R-OH)与对硝基酰氯摩尔比为1：1.2～1.5；二氯甲烷和三乙胺体积为20～25mL；萃取次数为3～5次；二氧六环体积为5～10mL；流动相中乙酸乙酯和甲醇体积比为10：1～20：1；

碳酸钾质量为0.8～1g；氨基甲酸酯类农药原料与2-溴乙酸乙酯或4-溴丁酸乙酯的摩尔比为1.5～2；氢氧化锂浓度为0.16～0.2g/mL；结晶中石油醚体积为10～20mL。

3.根据权利要求1所述的氨基甲酸酯类农药的抗体的制备方法，其特征在于：所述完全抗原(III)和(IV)中的载体蛋白为牛乳铁蛋白、牛血清白蛋白、血蓝蛋白或卵清蛋白。

4.根据权利要求1所述的氨基甲酸酯类农药的抗体的制备方法，其特征在于：所述完全抗原(III)的制备包括以下步骤：

S11.活化半抗原：在搅拌下半抗原N，N-二甲基甲酰胺溶液、1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐和N-羟基琥珀酰亚胺混合，室温下避光搅拌4～6h，得到A液；

S12.载体蛋白溶解于碳酸缓冲液，得到B液，载体蛋白浓度为5～10mg/mL；

S13.将S11的A液滴加到S12的B液中，用NaOH溶液或碳酸缓冲液调节pH至9.5～9.6，避光反应12～16h，透析纯化后获得完全抗原(III)；

半抗原1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐和N-羟基琥珀酰亚胺的摩尔比为1：1.2～1.5：1.2～1.5。

5.根据权利要求1所述的氨基甲酸酯类农药的抗体的制备方法，其特征在于：所述完全抗原(IV)的制备包括以下步骤：

S21.半抗原与1,4-二氧六环溶液，称为A2液；

S22.载体蛋白溶解在碳酸缓冲液，载体蛋白浓度为5～10mg/mL，称为B2液；

S23.将上述A2液体滴加到B2液中，之后用NaOH溶液调节pH至9.5～9.6，避光反应12～16h，透析纯化后获得完全抗原(IV)。

6.根据权利要求4或5所述的氨基甲酸酯类农药的抗体的制备方法，其特征在于：所述A液中半抗原与B液中的载体蛋白的摩尔比为30～40：1；

所述A2液中半抗原与B2液中的载体蛋白的摩尔比为30～40：1。

7.根据权利要求1所述的氨基甲酸酯类农药的抗体的制备方法，其特征在于：所述半抗原以及完全抗原(III)、(IV)通过单克隆抗体方式制备氨基甲酸酯类农药的抗体。