[发明专利]桑树亚精胺合成酶基因MnSPDS1及其应用

说明书

本发明公开了一种桑树亚精胺合成酶基因MnSPDS1及其引物在检测抗灰霉病能力方面的应用，包括：基因MnSPDS1的核苷酸序列；进一步地本发明要求保护一种桑树亚精胺合成酶基因MnSPDS1的制备方法、一种桑树亚精胺合成酶基因MnSPDS1的应用、一种桑树亚精胺合成酶基因MnSPDS1的荧光定量检测引物组、一种桑树亚精胺合成酶MnSPDS1、一种检测桑树抗灰霉病能力的方法。本发明克隆了桑树亚精胺合成酶基因MnSPDS1，并通过逆境胁迫实验初步了解了桑树亚精胺合成酶基因MnSPDS1的功能，从而为桑树的抗逆性改良奠定了基础。

技术领域

本发明涉及分子生物学技术领域。更具体地说，本发明涉及桑树亚精胺合成酶基因MnSPDS1在检测抗灰霉病能力方面的应用。

背景技术

桑树是重要的经济作物，属于桑科桑属，在我国不同地方均有种植。桑叶不仅用于养蚕，桑树中还含有很多有益成分，如酚类物质、生物碱、多糖等。桑树中的DNJ和多糖都有降血糖的功能。而亚精胺(spermidine，SPD)可以作为信号分子参与植物响应逆境胁迫。在SPD的生物合成中，亚精胺合成酶(spermidine synthase，SPDS)是催化腐胺合成SPD的关键酶。目前为止，还未见有亚精胺能否诱导桑树产生对逆境胁迫抗性的相关研究和报道。另在四川、浙江等蚕区，桑树在春季极易发生灰霉病，对桑叶产质量影响极大，因此如何检测桑树抗灰霉病的能力，是目前急需解决的问题。

发明内容

本发明的一个目的是解决至少上述问题，并提供至少后面将说明的优点。

本发明还有一个目的是提供一种桑树亚精胺合成酶基因MnSPDS1，其能够筛选出具有抗逆性的桑树幼苗。

为了实现根据本发明的这些目的和其它优点，提供了一种桑树亚精胺合成酶基因MnSPDS1，所述桑树亚精胺合成酶基因MnSPDS1的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。

本发明进一步要求保护所述的桑树亚精胺合成酶基因MnSPDS1的制备方法，包括以下步骤：

a、从桑树树叶中提取总RNA；

b、利用上游引物MnSPDS1-F和下游引物MnSPDS1-R将总RNA反转录获得基因MnSPDS1。

本发明进一步要求保护所述的桑树亚精胺合成酶基因MnSPDS1的应用，所述桑树亚精胺合成酶基因MnSPDS1用于检测桑树抗灰霉病的能力。

本发明进一步要求保护桑树亚精胺合成酶基因MnSPDS1的荧光定量检测引物组，所述荧光定量检测引物组包括上游引物MnSPDS1-F和下游引物MnSPDS1-R，其序列分别如SEQIDNO.5和SEQIDNO.6所示。

本发明进一步要求保护一种桑树亚精胺合成酶MnSPDS1，所述桑树亚精胺合成酶MnSPDS1的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示。

本发明进一步要求保护一种检测桑树抗灰霉病能力的方法，包括以下步骤：

将灰霉菌菌丝接种到桑树树叶上，侵染预定时间后取下叶片，得侵染叶片；

通过侵染叶片提取包括桑树亚精胺合成酶基因MnSPDS1的cDNA溶液；

配制包含cDNA溶液的实时荧光定量PCR反应体系，并置于荧光定量PCR仪中，设置反应程序如下：进行30个循环后控制温度为72℃延伸7min，其中，一个循环为：控制温度为55℃退火30s，控制温度为72℃延伸2min；循环前先控制温度为95℃进行预变性5min；

反应完成后得到桑树亚精胺合成酶基因MnSPDS1的Ct值；