[发明专利]桑树亚精胺合成酶基因MnSPDS1及其应用

权利要求书

1.一种桑树亚精胺合成酶基因MnSPDS1，其特征在于，所述基因MnSPDS1的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。

2.如权利要求1所述的桑树亚精胺合成酶基因MnSPDS1的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

a、从桑树树叶中提取总RNA；

b、利用上游引物MnSPDS1-F和下游引物MnSPDS1-R将总RNA反转录获得基因MnSPDS1。

3.如权利要求1所述的桑树亚精胺合成酶基因MnSPDS1的应用，其特征在于，所述桑树亚精胺合成酶基因MnSPDS1用于检测桑树抗灰霉病的能力。

4.一种桑树亚精胺合成酶基因MnSPDS1的荧光定量检测引物组，其特征在于，所述荧光定量检测引物组包括上游引物MnSPDS1-F和下游引物MnSPDS1-R，其序列分别如SEQIDNO.5和SEQIDNO.6所示。

5.一种桑树亚精胺合成酶MnSPDS1，其特征在于，所述桑树亚精胺合成酶MnSPDS1的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示。

6.一种检测桑树抗灰霉病能力的方法，其特征在于，包括以下步骤：

将灰霉菌菌丝接种到桑树树叶上，侵染预定时间后取下叶片，得侵染叶片；

通过侵染叶片提取包括桑树亚精胺合成酶基因MnSPDS1的cDNA溶液；

配制包含cDNA溶液的实时荧光定量PCR反应体系，并置于荧光定量PCR仪中，设置反应程序如下：进行30个循环后控制温度为72℃延伸7min，其中，一个循环为：控制温度为55℃退火30s，控制温度为72℃延伸2min；循环前先控制温度为95℃进行预变性5min；

反应完成后得到桑树亚精胺合成酶基因MnSPDS1的Ct值；

配置包括桑树A3基因的实时荧光定量PCR反应体系用作对照，得到对照基因A3的Ct值，得到目的基因桑树亚精胺合成酶基因MnSPDS1和对照基因A3的Ct值，使用2^-ΔΔCt方法计算基因MnSPDS1相对表达量。ΔCt＝(Ct_目的基因-Ct_A3)；ΔΔCt＝(ΔCt_处理-ΔCt_未处理)。设“2^{-ΔΔCt对照}＝1”，如果“2^{-ΔΔCt目的基因}1”，则基因的表达上调，所检测的桑树植株抗灰霉病能力较强；反之基因的表达下调，所检测的桑树植株抗灰霉病能力较弱。

7.如权利要求6所述的检测桑树抗灰霉病能力的方法，其特征在于，实时荧光定量PCR反应体系的配制为将2μl的25～50ng/μl的cDNA溶液、10μl的2xSYBR Premix、2μl的浓度为25μM的Rox Reference Dye、1μl的浓度为10μM的MnSPDS1-F、1μl的浓度为10μM的MnSPDS1-R、4μl的ddH₂O混合。