[发明专利]提高桑树抵御干旱胁迫的NCED基因及其构建和用途在审
| 申请号： | 202110263289.6 | 申请日： | 2021-03-11 |
| 公开（公告）号： | CN112980853A | 公开（公告）日： | 2021-06-18 |
| 发明（设计）人： | 刘丹;邱长玉;林强;朱方容;朱光书;唐燕梅;崔秋英;韦伟;张朝华;李韬;卢德;石华月;陈芳;林强轩 | 申请（专利权）人： | 广西壮族自治区蚕业技术推广站 |
| 主分类号： | C12N15/53 | 分类号： | C12N15/53;C12N9/02;C12N15/82;C12N15/66;A01H5/00;A01H6/00 |
| 代理公司： | 北京远大卓悦知识产权代理有限公司 11369 | 代理人： | 邓雪明 |
| 地址： | 530007 广西壮*** | 国省代码： | 广西;45 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 提高 桑树 抵御 干旱 胁迫 nced 基因 及其 构建 用途 | ||
1.提高桑树抵御干旱胁迫的NCED基因，其特征在于，所述NCED基因为如下(a)、(b)、(c)或(d)的碱基序列：
(a)如SEQ ID NO:1所示；
(b)如SEQ ID NO:2所示；
(c)编码如SEQ ID NO:3或4所示的氨基酸序列的核苷酸序列；
(d)在严谨杂交条件下与(a)或(b)限定的核苷酸序列杂交且编码具有提高桑树抵御干旱胁迫功能的核苷酸序列。
2.一种重组载体，其特征在于，其含有权利要求1所述的NCED基因和与所述NCED基因可操作地连接的用于表达的调节序列。
3.宿主细胞，其特征在于，所述宿主细胞含有权利要求1所述的NCED基因或权利要求2所述的重组载体。
4.提高桑树抵御干旱胁迫的蛋白质，其为如SEQ ID NO:3或4所示的氨基酸序列。
5.提高桑树抵御干旱胁迫的NCED重组载体的构建方法，其特征在于，包括如下步骤：
步骤一、从川桑中分别利用如SEQ ID NO:5和如SEQ ID NO:6所示的引物对、如SEQ IDNO:7和如SEQ ID NO:8所示的引物对扩增得到包含SEQ ID NO:1的碱基序列和包含SEQ IDNO:2所示的碱基序列，并分别连接到peasy-blunt载体，构建出peasy-blunt-NCED1和出peasy-blunt-NCED3重组载体；
步骤二、以peasy-blunt-NCED1重组载体为模板、利用如SEQ ID NO:9和如SEQ ID NO:10所示的引物对进行扩增得到包含SEQ ID NO:1的碱基序列，经过酶切和连接后转化入大肠杆菌E.coli DH5a中得到PLGNL-NCED1表达载体；
步骤三、以peasy-blunt-NCED3重组载体为模板、利用如SEQ ID NO:11和如SEQ ID NO:12所示的引物对进行扩增得到包含SEQ ID NO:2的碱基序列，经过酶切和连接后转化入大肠杆菌E.coli DH5a中得到PLGNL-NCED3表达载体。
6.如权利要求5所述的赖氨酸营养缺陷型突变体的构建方法，其特征在于，步骤二和步骤三中，所述酶切均采用Kpn I和Spe I双酶切体系酶切基因产物和植物表达载体PLGNL。
7.桑树NCED基因于提高桑树抵御逆境胁迫、桑树抗旱新品种的培育和/或科学研究中的用途，其特征在于，所述桑树NCED基因为如SEQ ID NO:1或SEQ ID NO:2所示的碱基序列。
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