[发明专利]一种脐带间充质干细胞的培养方法及其应用

说明书

本发明涉及细胞培育技术领域，尤其是一种脐带间充质干细胞的培养方法,S1、准备培养瓶、镊子、剪刀，并对器材进行消毒处理；S2、取出脐带备用，对脐带进行清洗，去除血迹；S3、将清洗之后的组织块进行静置45‑50min，去除上清液；S4、将组织块加入到5‑7倍的0.25％胰酶液中；S5、进行营养液的配置，采用去离子水、FBS、细胞因子混合而成，将混合好的营养液移至培养瓶中；S6、取S5中的溶液50ml移至培养瓶中，放置到37摄氏度的环境下进行培育，同时控制空气的浓度为95％二氧化碳浓度为5％，本发明还提供了一种脐带间充质干细胞的应用。本发明有利于提高干细胞的存活分裂，保证了干细胞的培养效果。

技术领域

本发明涉及细胞培育技术领域，尤其涉及一种脐带间充质干细胞的培养方法及其应用。

背景技术

间充质干细胞是干细胞家族的重要成员，来源于发育早期的中胚层，属于多能干细胞，MSC最初在骨髓中发现，因其具有多向分化潜能、造血支持和促进干细胞植入、免疫调控和自我复制等特点而日益受到人们的关注。

如间充质干细胞在体内或体外特定的诱导条件下，可分化为脂肪、骨、软骨、肌肉、肌腱、韧带、神经、肝、心肌、内皮等多种组织细胞，连续传代培养和冷冻保存后仍具有多向分化潜能，可作为理想的种子细胞用于衰老和病变引起的组织器官损伤修复。现有的间充质干细胞在进行培育时，没有在进行培育时，容易使细胞的生长环境受到影响，导致干细胞的存活分裂受到影响，影响了干细胞的培育效果。

发明内容

本发明的目的是为了解决现有技术中存在的使细胞的生长环境受到影响，导致干细胞的存活分裂受到影响，影响了干细胞的培育效果缺点，而提出的一种脐带间充质干细胞的培养方法及其应用。

为了实现上述目的，本发明采用了如下技术方案：

设计一种脐带间充质干细胞的培养方法及其应用，包括以下步骤：

S1、准备培养瓶、镊子、剪刀，并对器材进行消毒处理；

S2、取出脐带备用，对脐带进行清洗，去除血迹，将脐带放入到酒精中对脐带进行浸泡，时间为30-40min，结束后将脐带进行取出，用剪刀进行剪碎，形成组织块，将剪碎的脐带放入到0.9％的氯化钠溶液中进行继续清洗，直至清洗液为清亮为止；

S3、将清洗之后的组织块进行静置45-50min，去除上清液；

S4、将组织块加入到5-7倍的0.25％胰酶液中，在温度为37摄氏度下消化35-45min，每隔6-8min进行震荡一次，对细胞进行分离，静置6-8min，使未分散的组织块下沉，取悬液加入到离心管中，进行离心处理，结束后加入3-4ml的细胞生长液；

S5、进行营养液的配置，采用去离子水、FBS、细胞因子混合而成，将混合好的营养液移至培养瓶中；

S6、取S5中的溶液50ml移至培养瓶中，放置到37摄氏度的环境下进行培育，同时控制空气的浓度为95％二氧化碳浓度为5％。

优选的，在进行消毒处理时包括以下步骤：

A1、将器材放入到蒸汽高压锅中，使高压锅的温度控制为65-70摄氏度，时间为5-8min；

A2、将温度上升到90-100摄氏度，时间为3-4min；

A3、将温度上升到122-128摄氏度，时间为15-20min。

优选的,在进行离心处理时包括以下步骤：

B1、将离心管置于离心机上，控制离心机的转速为1000r/min，离心的时间为8-10min，去除上清液；

B2、加入平衡盐酸溶液8ml，冲散细胞，再离心一次，去除上清液。