[发明专利]一种脐带间充质干细胞的培养方法及其应用

权利要求书

1.一种脐带间充质干细胞的培养方法，其特征在于，包括以下步骤：

S1、准备培养瓶、镊子、剪刀，并对器材进行消毒处理；

S2、取出脐带备用，对脐带进行清洗，去除血迹，将脐带放入到酒精中对脐带进行浸泡，时间为30-40min，结束后将脐带进行取出，用剪刀进行剪碎，形成组织块，将剪碎的脐带放入到0.9％的氯化钠溶液中进行继续清洗，直至清洗液为清亮为止；

S3、将清洗之后的组织块进行静置45-50min，去除上清液；

S4、将组织块加入到5-7倍的0.25％胰酶液中，在温度为37摄氏度下消化35-45min，每隔6-8min进行震荡一次，对细胞进行分离，静置6-8min，使未分散的组织块下沉，取悬液加入到离心管中，进行离心处理，结束后加入3-4ml的细胞生长液；

S5、进行营养液的配置，采用去离子水、FBS、细胞因子混合而成，将混合好的营养液移至培养瓶中；

S6、取S5中的溶液50ml移至培养瓶中，放置到37摄氏度的环境下进行培育，同时控制空气的浓度为95％二氧化碳浓度为5％。

2.根据权利要求1所述的一种脐带间充质干细胞的培养方法，其特征在于，在进行消毒处理时包括以下步骤：

A1、将器材放入到蒸汽高压锅中，使高压锅的温度控制为65-70摄氏度，时间为5-8min；

A2、将温度上升到90-100摄氏度，时间为3-4min；

A3、将温度上升到122-128摄氏度，时间为15-20min。

3.根据权利要求1所述的一种脐带间充质干细胞的培养方法，其特征在于,在进行离心处理时包括以下步骤：

B1、将离心管置于离心机上，控制离心机的转速为1000r/min，离心的时间为8-10min，去除上清液；

B2、加入平衡盐酸溶液8ml，冲散细胞，再离心一次，去除上清液。

4.根据权利要求1所述的一种脐带间充质干细胞的培养方法，其特征在于，在对脐带进行剪碎时，保证组织块的体积为0.8-1立方毫米。

5.根据权利要求1所述的一种脐带间充质干细胞的培养方法，其特征在于，在对脐带进行清洗时，采用37摄氏度的浓度为0.9％的氯化钠溶液进行冲洗。

6.根据权利要求1所述的一种脐带间充质干细胞的培养方法，其特征在于，采用的酒精浓度为75％。

7.根据权利要求1所述的一种脐带间充质干细胞的培养方法，其特征在于，在去悬液到离心管中时，包括以下步骤：

C1、在离心管的上方绑上0.22um滤膜过滤；

C2、将悬液进行取出，使悬液穿过滤膜，对悬液进行过滤；

C3、过滤结束后，将滤膜进行取下。

8.根据权利要求1-7任一项所述的一种脐带间充质干细胞的应用，其特征在于，将培育出来的干细胞用于生产组织和细胞。