[发明专利]一种杂交枫香遗传转化的方法

权利要求书

1. 一种杂交枫香胚性愈伤组织的遗传转化方法，其特征是，包括如下顺序进行的步骤：

1）制备浸染菌液

将EHA105农杆菌接种于共培养培养基中，进行液体悬浮培养，直至菌液的浓度OD₆₀₀达到0.2-0.8，制得浸染菌液，其中，所述共培养培养基为：改良Blaydes基本培养基 + 水解酪蛋白1g/L +蔗糖40 g/L+2,4-D 0.5-2 mg/L + 6-BA 0-1 mg/L+ AS 50-100μM；

2）浸染处理

首先，将杂交枫香的胚性愈伤组织进入浸染菌液中，进行振荡处理；接着倒掉浸染菌液，并吸干愈伤组织表面的浸染菌液；然后将胚性愈伤组织转移至用共培养培养基润湿的滤纸上，于黑暗条件下进行浸染-共培养处理，获得浸染愈伤组织，其中所述共培养培养基为：改良Blaydes基本培养基 + 水解酪蛋白1g/L +蔗糖40 g/L+2,4-D 0.5-2 mg/L + 6-BA0-1 mg/L+ AS 50-100μM；

3）恢复培养

首先用含有头孢霉素的无菌水冲洗浸染愈伤组织3-4次，其中所述含头孢霉素的无菌水中头孢霉素的浓度为300-400mg/L；冲洗时间为15-25min/次；接着吸干愈伤组织表面的液体；然后将胚性愈伤组织转移至恢复培养基中，进行恢复培养，获得恢复培养愈伤组织，其中所述恢复培养基为：改良Blaydes基本培养基 + 水解酪蛋白1g/L +蔗糖40 g/L+ 植物凝胶0.5-3%+ 2,4-D 0.5-2 mg/L + 6-BA 0-1 mg/L+Cef 300-400mg/L；

4）筛选培养

将恢复培养愈伤组织转移至筛选培养基中，进行筛选培养，获得抗性愈伤组织，其中所述筛选培养基为：改良Blaydes基本培养基 + 水解酪蛋白1g/L +蔗糖40 g/L+ 植物凝胶0.5-3%+ 2,4-D 0.5-2 mg/L + 6-BA 0-1 mg/L+Cef 300-400 mg/L +Hyg 0-20 mg/L；

其中所述改良Blaydes基本培养基配方如下（mg/L）：

3]]>	1000
4.7H2O]]>	71.5
2PO4]]>	300
2.2H2O]]>	210
KCl	71.5
4NO3]]>	1000
3)2·4H2O]]>	500
4·4H2O]]>	6.06
4·7H2O]]>	4
3BO3]]>	2
KI	0.6
2MoO4·2H2O]]>	0.0025
4·5H2O]]>	0.025
2·6H2O]]>	0.025
2EDTA·2H2O]]>	37.2
4·7H2O]]>	27.8
肌醇	2
烟酸	0.1
维生素B6	0.1
维生素B1	1。