[发明专利]具有提高的温度稳定性的四聚体α/β水解酶变体及其使用和生产方法

权利要求书

1.一种亲代α/β水解酶的变体，所述变体包括对应于如下位置的一个或多个位置处的置换：SEQ ID NO:1(优选使用SEQ ID NO:1的编号)167、168、174、218、155、175、179、182、183、186、187、268、306、10、17、28、39、47、50、57、58、59、63、65、69、126、139、225、230、245、251、281、287、289、293和304，其中所述变体具有α/β水解酶活性，并且，其中所述变体是与SEQ ID NO:1的多肽具有至少71％(优选：至少72％、至少73％、至少74％、至少75％、至少76％、至少77％、至少78％、至少79％、至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少95.5％、至少96％、至少96.5％、至少97％、至少97.5％、至少98％、至少98.5％、至少99％或至少99.5％)但小于100％序列同一性的多肽，优选地，所述变体具有水解酶EC:3.1.1.-活性。

2.根据前述权利要求任一项所述的变体，其中所述变体具有如下一种或多种特性：

i)相对于亲代α/β水解酶的改进的性质，其中所述改进的性质包括提高的温度稳定性，优选是相比于SEQ ID NO:1的提高的温度稳定性；所述变体能够四聚体化，优选具有四聚体四级结构，进一步优选地，所述四聚体化是同源四聚体化；

ii)熔点(Tm)大于50℃，优选地，所述Tm的范围是大约51℃至大约70℃；

iii)能够降解玉米赤霉烯酮和/或其衍生物；

iv)包括与选自如下的氨基酸序列具有至少80％(优选至少83％、更优选至少90％)序列同一性的至少一个(优选至少两个、更优选至少三个、最优选至少四个)氨基酸基序：

a)SEQ ID NO:36(QVDLGEX₁X₂MN)，其中X₁是V或I，优选V，并且，其中X₂是V或T，优选V；

b)SEQ ID NO:37(EYDPEWX₃RX₄FX₅EGTV)，其中X₃是G或A，优选A，并且，其中X₄是A或V，优选A，并且，其中X₅是F或Y；

c)SEQ ID NO:38(MLX₆QVKTPX₇LX₈THH)，其中X₆是S或G，优选S，并且，其中X₇是I或V，优选I，并且，其中X₈是I或L，优选I；

d)SEQ ID NO:39

(PAX₉LLX₁₀PEQTGSWWSYEX₁₁X₁₂X₁₃GLLX₁₄EX₁₅FHVX₁₆AVDX₁₇RGQGRSX₁₈WTPX₁₉RYSLDNFGNDLVRFIX₂₀LVX₂₁KRPVX₂₂VX₂₃GNSSGGX₂₄LAAWLSAYX₂₅MPGQX₂₆RX₂₇X₂₈LCEDX₂₉X₃₀FFASELVPAX₃₁GHSVX₃₂QX₃₃AGPX₃₄FELX₃₅R)其中X₉是V或L，优选L，并且，其中X₁₀是L或I，优选L，并且，其中X₁₁是P或E，优选P，并且，其中X₁₂是V或A，优选V，并且，其中X₁₃是I或M，优选I，并且，其中X₁₄是A或S，优选A，并且，其中X₁₅是S、N或H，优选S，并且，其中X₁₆是F或Y，优选F，并且，其中X₁₇是I或L，优选I，并且，其中X₁₈是T或S，优选T，并且，其中X₁₉是K或R，优选K，并且，其中X₂₀是S、A或N，优选S，并且，其中X₂₁是V或I，优选V，并且，其中X₂₂是I或V，优选I，并且，其中X₂₃是S或A，优选S，并且，其中X₂₄是V或L，优选V，并且，其中X₂₅是A或S，优选A，并且，其中X₂₆是I或L，优选I，并且，其中X₂₇是A或G，优选A，并且，其中X₂₈是A或V，优选A，并且，其中X₂₉是T、A或P，优选T，并且，其中X₃₀是P或A，优选P，并且，其中X₃₁是Y或H，优选H，并且，其中X₃₂是L或R，优选R，并且，其中X₃₃是A或G，优选A，并且，其中X₃₄是A或V，优选A，并且，其中X₃₅是Y或F，优选Y。