[发明专利]同时检测血液样本中醛固酮和肾素活性的方法及试剂盒

说明书

本发明公开了一种同时检测血液样本中醛固酮和肾素活性的方法及试剂盒，包括样品前处理步骤和进样检测步骤，其中，样品前处理包括如下步骤：向血液样本中加入孵育缓冲液，孵育设定时间后，加入pH值调节剂，净化后，得处理液，将处理液氮气吹干，后采用流动相复溶，得待测液；所述pH值调节剂为甲酸、氨水或乙酸铵；采用液相色谱串联质谱方法进行检测。本发明方法的优化方向一方面在于，针对血管紧张素I的物理性质，优化前处理过程，采用10～100mM的乙酸铵为pH值调节剂，降低其在待测溶液中的质子化解离，提高其在SPE处理中的回收率，大大提高了物质的检测灵敏度；另一方面，经SPE提取后，增加氮吹操作，复溶后进行上样，对检测信号的提高。

技术领域

本发明属于生物检测技术领域，具体涉及一种同时检测血液样品中醛固酮和肾素活性的方法及试剂盒。

背景技术

公开该背景技术部分的信息仅仅旨在增加对本发明的总体背景的理解，而不必然被视为承认或以任何形式暗示该信息构成已经成为本领域一般技术人员所公知的现有技术。

肾素即血管紧张素原酶，一种蛋白水解酶，其与血管紧张素、醛固酮协同调节人体血压平衡，属于强升压物质，最早见于兔肾脏提取物中。肾素来源于体内或体外低活性肾素原的转化，除了体内酶的作用外，在体外含酸(pH值3)及低温(4℃左右)的条件下，肾素原也可以转化为活性肾素。

当血压降低时，肾脏分泌出肾素，在人体内具有活性的肾素可催化分布在血液中的血管紧张素原转化为血管紧张素(angiotensin I，Ang I)，而血液和肺组织中的血管紧张素转化酶(angiotensin converting enzyme，ACE)使Ang I降解为Ang II。Ang II可增加醛固酮的生成，同时Ang II也可以通过有效收缩血管，从而升高血压。

醛固酮(即ALD)是肾上腺皮质分泌出的盐皮质激素，主要的作用是保钠排钾，通过调节血容量维持体液水盐平衡。与醛固酮相关的原发性醛固酮增多症(primaryaldosteronism，PA)是因肾上腺皮质病变导致醛固酮分泌增多，肾素-血管紧张素(reninangiotensinsystem，RAS)系统受抑制，是继发性高血压的常见病因，占到10％左右，临床表现为高血压和/或低血钾。

综上，血浆肾素活性(即PRA)，可作为原发性或继发性高血压的诊疗指标，对辅助诊断PA、嗜铬细胞瘤等循环系统疾病及指导高血压用药具有重要意义。目前，PRA主要通过监测AngI的产生速率来进行监测，而PA的临床诊疗指南则指出，应将ALD与PRA的比值作为PA的初级筛查指标，国际上ARR常用切点为30(ng/dl)/(ng/ml.h)，之后的确诊试验结果，若血浆ALD5ng/dl排除PA，ALD11.45ng/dl确诊PA。作为一种可以被治愈的高血压，如果能得到准确诊断，那么就可以与原发性高血压区分开来，从而有效治疗治愈。

但是发明人发现，传统的血浆PRA测定(即AngI产生速率)及ALD监测较多地应用了免疫法，再加上人体中的ALD的含量很低，不可避免地会受免疫交叉反应地干扰，尤其是对于女性患者而言，假如处在黄体期，肾素的浓度会降低，相对比男性的肾素浓度水平，更容易受到免疫交叉副产物干扰，造成肾素浓度波动，从而更容易出现交叉反应，此生理阶段醛固酮的浓度水平又会升高，导致假阳性率加大，准确性差，且无法同时检测AngI和ALD，不同实验室之间检测结果差异也较大。

发明内容

针对现有技术中存在的技术问题，本发明提供一种同时检测血液样本中醛固酮和肾素活性的方法及试剂盒。

为解决以上技术问题，本发明的以下一个或多个实施例提供了如下技术方案：

第一方面，本发明提供一种同时检测血液样本中醛固酮和肾素活性的方法，包括样品前处理步骤和进样检测步骤，其中，