[发明专利]同时检测血液样本中醛固酮和肾素活性的方法及试剂盒

权利要求书

1.一种同时检测血液样本中醛固酮和肾素活性的方法，其特征在于：包括样品前处理步骤和进样检测步骤，其中，

样品前处理包括如下步骤：向血液样本中加入孵育缓冲液，孵育设定时间后，加入pH值调节剂，净化后，得处理液，将处理液氮气吹干，后采用流动相复溶，得待测液；所述pH值调节剂为甲酸、氨水或乙酸铵；

采用液相色谱串联质谱方法进行检测。

2.根据权利要求1所述的同时检测血液样本中醛固酮和肾素活性的方法，其特征在于：所述血液样本为血浆或血清，优选为血清。

3.根据权利要求1所述的同时检测血液样本中醛固酮和肾素活性的方法，其特征在于：甲酸的浓度为0.1～2％，优选为1％，％为质量百分数；

氨水的浓度为0.5～8％，优选为5％，％为质量百分数；

乙酸铵的浓度为10～100mM，优选为50mM；

进一步的，血液样本的pH值调节剂为10～100mM的乙酸铵。

4.根据权利要求1所述的同时检测血液样本中醛固酮和肾素活性的方法，其特征在于：所述孵育缓冲液为Tris-base与EDTA的混合液，其中的pH值调节剂为冰醋酸；

进一步的，所述孵育缓冲液的pH值为6.0-6.5；

在一些实施例中，孵育的时间为2.5-3.5h，孵育的温度为36.5-37℃。

5.根据权利要求1所述的同时检测血液样本中醛固酮和肾素活性的方法，其特征在于：向血液样本中加入pH值调节剂后，采用Biotage EVOLUTE EXPRESS ABN进行纯化；

进一步的，将血液样本上样Biotage EVOLUTE EXPRESS ABN后，分别经由纯水和10％乙腈淋洗后，采用纯甲醇洗脱，获得处理液；

在一些实施例中，还包括向血液样本中加入内标溶液的步骤；

进一步的，所述内标溶液为含有ALD-D7和Ang I-13C15N，其浓度分别为1ng/mL和3ng/mL；

更进一步的，血液样本、内标溶液和孵育缓冲液的体积比为8-12:8-12:5-7，优选为10:10:6；

进一步的，血液样本与复溶溶液的体积比为4-6:2，优选为5:2。

6.根据权利要求1所述的同时检测血液样本中醛固酮和肾素活性的方法，其特征在于：液相色谱串联质谱系统为YS EXACT 9050MD、YS EXACT 9900MD、岛津LCMS-8050或AB4500MD，正离子电喷雾离子化的多离子反应监测；

在一些实施例中，液相色谱的条件为：流动相A为含2-10mM氟化铵HPLC级水；流动相B为纯甲醇；梯度洗脱；

进一步的，液相色谱的色谱柱为C18脂溶性色谱柱子100mm×2.1mm，3.0μm，柱温：40℃；

进一步的，梯度洗脱程序为：0-0.5min，流动相B的体积分数为30％；0.5-1min，流动相B的体积分数为50％；1-3min，流动相B的体积分数为60％；3-3.1min，流动相B的体积分数为95％；4-4.1min，流动相B的体积分数为30％；4.1-5min，流动相B的体积分数为30％。

7.根据权利要求1所述的同时检测血液样本中醛固酮和肾素活性的方法，其特征在于：质谱条件为：采用电喷雾ESI源，喷雾电压4500V，离子传输管温度300℃，蒸发温度350℃，鞘气40arb，辅气5arb，采用MRM模式采集数据；

进一步的，MRM的质谱参数为：

Ang I：极性为Positive，母离子m/z，433.1；子离子m/z，647.5；定性子离子m/z，70.33；碰撞能量V，35.6；射频电压V，78.75；

ALD：极性为Positive，母离子m/z，为361.1；子离子m/z，322.5；定性子离子m/z，185.3；碰撞能量V，27.67；射频电压V，67.6。