[发明专利]一种细菌耐氯性的快速评价方法

权利要求书

1.一种细菌耐氯性的快速评价方法，其特征在于，对细菌进行驯养——进行氯消毒试验——进行细菌活性检测——计算氯耐受指数——实现细菌耐氯性评价，具体步骤如下：

(1)菌的驯养：以菌株原生长环境水体或无菌磷酸盐PBS缓冲液作为细菌驯养基质液，对待评价菌株进行驯养，得到驯养的菌液；

(2)氯消毒试验：步骤(1)驯养的菌液经离心收集菌细胞，用稀释介质制备成菌悬液，流式细胞仪上机进行细胞计数；根据计数结果稀释制备消毒用工作菌液，加入氯消毒剂进行消毒试验，试验完毕加入足量反应终止剂至去除残留余氯；

(3)菌细胞浓度计算：步骤(2)终止反应后，使用流式细胞仪对消毒后菌液细胞活性进行检测，按照活性将菌细胞分为活体菌、死亡菌以及受损菌三个群体，按照公式(1)计算消毒后菌细胞浓度：

N＝C_L+C_I×50％ 公式(1)

式中：N-消毒后菌细胞浓度；

C_L-活体菌细胞浓度，cells/mL；

C_I-受损菌细胞浓度，cells/mL；

(4)氯耐受指数计算：按照公式(2)计算氯耐受指数：

式中：R-氯耐受指数；

N₀-消毒起始菌细胞浓度，cells/mL；

N-消毒后菌细胞浓度，cells/mL；

(5)耐氯性评价：以氯耐受指数作为评价指标，待评价菌株氯耐受指数R大于等于1，评价为高耐氯菌株；待评价菌株氯耐受指数R大于等于0.8且小于1，评价为中等耐氯菌株待；评价菌株氯耐受指数R大于等于0.5且小于0.8，评价为为低耐氯菌株；待评价菌株氯耐受指数R小于0.5，评价为不耐氯菌株；

若消毒结束后菌液浓度为0，跳过氯耐受指数计算，直接评价为不耐氯菌株；

步骤(2)中消毒试验所述的氯消毒剂为次氯酸钠溶液，消毒起始浓度为：以余氯计，2.5mg/L；接触时间为30min；

步骤(2)中所述流式细胞仪上机分析计数及步骤(3)中所述使用流式细胞仪对消毒后菌液细胞活性进行检测的步骤为：

①取驯养后菌液500μL，向其中加入噻唑橙和碘化丙啶以及绝对计数微球，荧光染料终浓度分别为0.4μmol/L、40μmol/L，绝对计数微球终浓度为10³个/μL，室温、黑暗静置孵育5-10min进行染色；

②流式细胞仪上机分析：激光器为488nm，收集10000个Events采集荧光信号并按照绝对计数微球进行菌细胞浓度计算。

2.根据权利要求1所述的细菌耐氯性的快速评价方法，其特征在于，步骤(1)中所述的驯养基质液为经0.2μm的聚碳酸酯膜过滤后的菌株原生长环境水体或pH为7.2-7.4的无菌磷酸盐PBS缓冲液。

3.根据权利要求1所述的细菌耐氯性的快速评价方法，其特征在于，步骤(1)中所述驯养的温度为22℃，时间为7d，振荡转速为100rpm/min。

4.根据权利要求1所述的细菌耐氯性的快速评价方法，其特征在于，步骤(2)中所述离心的转速为3500rpm，时间为10min。

5.根据权利要求1所述的细菌耐氯性的快速评价方法，其特征在于，步骤(2)中所述稀释介质为pH为7.2-7.4的PBS缓冲液。

6.根据权利要求书1所述的细菌耐氯性的快速评价方法，其特征在于，步骤(2)中所述稀释制备消毒用工作菌液的浓度为10⁶-10⁷cells/mL。

7.根据权利要求1-6任一项所述的细菌耐氯性的快速评价方法，其特征在于，步骤(2)中所述的反应终止剂为硫代硫酸钠。