[发明专利]一种敲除Tim-3基因以延长T细胞体内生存的方法有效
| 申请号： | 202110256435.2 | 申请日： | 2021-03-09 |
| 公开（公告）号： | CN113061624B | 公开（公告）日： | 2023-08-18 |
| 发明（设计）人： | 矫士平;杨振煌 | 申请（专利权）人： | 矫士平;科士华（南京）生物技术有限公司 |
| 主分类号： | C12N15/85 | 分类号： | C12N15/85;C12N15/12;C12N5/10;C12N5/0783 |
| 代理公司： | 暂无信息 | 代理人： | 暂无信息 |
| 地址： | 210000 江苏省南京市江北新区新锦湖路3-*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 tim 基因 延长 细胞 体内 生存 方法 | ||
【权利要求书】：
1.一种敲除T细胞TIM-3基因的方法，包括将CRISPR-Cas9蛋白和gRNA制成RNP复合体，然后电穿孔方式将RNP复合体输送到T细胞中；
所述gRNA是通过基因组数据和生物信息学算法预测，并化学合成和修饰的靶向TIM-3基因RNA片段；
所述gRNA由SEQ ID NO.1、SEQ ID NO.2和SEQ ID NO.3所示的gRNA组成，且三者的摩尔比为1:1:1；Cas9:gRNA的配合比例是摩尔比1:1.5；
所述电穿孔方式将RNP复合体输送到T细胞中，使用仪器Lonza4D；
经过基因编辑的T细胞基因敲除率≥90％；
所述RNP复合体是核糖核蛋白复合体，是由特定CRISP-Cas9蛋白与gRNA形成的复合体。
2.根据权利要求1所述的敲除T细胞TIM-3基因的方法，其特征在于，电转程序编码NucleofectorEN-138或NucleofectorEH-115。
3.根据权利要求1所述的敲除T细胞TIM-3基因的方法，其特征在于，Cas9重组蛋白用量为10-20mg。
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