[发明专利]一种针对妊娠糖尿病的高通量检测试剂盒及其应用

说明书

本发明涉及一种针对妊娠糖尿病的高通量检测试剂盒及其应用，属于生物医药技术领域。本发明为针对妊娠糖尿病相关基因突变进行检测，提供了一种针对妊娠糖尿病多个相关位点的高通量检测方法和相关检测试剂盒，该方法能够同时对一个样本的多个妊娠糖尿病相关基因突变进行分析，具有灵敏度高、针对性强、覆盖全面、通量大、准确性高等优点。

技术领域

本发明涉及一种针对妊娠糖尿病的高通量检测试剂盒及其应用，属于生物医药技术领域。

背景技术

妊娠糖尿病(GDM)是妊娠期常见并发症之一，主要表现为妊娠期间不同程度的糖代谢异常。根据一项来自不同国家的多中心前瞻性临床研究显示：GDM的发生率为9.3％-25.5％，即几乎每5个孕妇中就会出现一例GDM患者。中国GDM发病率约为17.5％。GDM常伴发先兆子痫、巨大儿，胎儿发育畸形、围产儿死亡等不良妊娠结局。并且易增加“胎源性疾病”。

迄今，妊娠糖尿病确切病因尚不十分清楚。临床诊断GDM的时间是在妊娠24-28周，通过糖耐试验确定。然而在此时间点诊断，尽管通过积极干预能够改善预后，但在干预前母儿的健康实际上已受到不同程度的影响。因此，GDM的早期筛查十分重要。近年来遗传学研究发现了TCF7L2、GCKR、KCNJ11等致病基因，并且发现这些相关基因的突变与妊娠期糖尿病有一定的相关性。但以往的分子学诊断依赖Sanger测序，而常规的一代测序中每个基因需要多次PCR，DNA用量大，花费高且实验周期长，往往需要逐一检测多个候选基因，在成本与耗时方面不能满足大规模测序的需求。而靶向捕获二代测序技术对于遗传性妊娠糖尿病的分子诊断具有明显优势，弥补了一代测序的缺陷，可实现同时筛查多个样本及同一类疾病的多个致病基因，为妊娠糖尿病的诊断开辟了新的领域。

发明内容

本发明的目的是为解决如何同时筛查多个样本及妊娠糖尿病的多个致病基因的技术问题。

为达到解决上述问题的目的，本发明所采取的技术方案是提供一种针对妊娠糖尿病致病基因INSR突变的基因检测试剂，包括核苷酸序列分别为SEQ ID No.1、SEQ ID No.2、SEQ ID No.3和SEQ ID No.4的引物；所述INSR突变是杂合突变；所述INSR突变的突变位置是chr19-7132208，位于外显子14，而且所述突变的碱基变化是c.2803TC。

本发明提供一种针对妊娠糖尿病致病基因INSR突变的基因检测试剂，包括核苷酸序列分别为SEQ ID No.1、SEQ ID No.2、SEQ ID No.3和SEQ ID No.5的引物；所述INSR突变是杂合突变；所述INSR突变的突变位置是chr19-7132208，位于外显子14，而且所述突变的碱基变化是c.2803TC。

本发明提供一种针对妊娠糖尿病致病基因INSR突变的基因检测的高通量检测试剂盒，包括上述的试剂。

优选地，上述的一种针对妊娠糖尿病致病基因INSR突变的基因检测试剂在制备妊娠糖尿病鉴定、评估或辅助治疗的试剂或试剂盒中的应用。

本发明提供上述的一种针对妊娠糖尿病致病基因INSR突变的基因检测试剂应用于妊娠糖尿病致病基因INSR突变的基因检测的方法，包括以下步骤：

步骤1：提取检测对象的基因组DNA，所述基因组DNA样本是从妊娠糖尿病患者血浆中分离的；

步骤2：对提取的基因组DNA进行定量，并取3μg建立文库；

步骤3：对文库进行定量操作；

步骤4：上机测序，所述上机测序通过二代测序平台进行；

步骤5：通过对所得测序数据与人类基因组的参考序列进行对比，最终对所测基因的每个突变位点情况进行分析，得到致病突变相关信息。

优选地，上述步骤2中建立文库的具体步骤如下：

步骤2.1：将基因组DNA进行片段化；