[发明专利]一种针对妊娠糖尿病的高通量检测试剂盒及其应用

权利要求书

1.一种针对妊娠糖尿病致病基因INSR突变的基因检测试剂，其特征在于：包括核苷酸序列分别为SEQ ID No.1、SEQ ID No.2、SEQ ID No.3和SEQ ID No.4的引物；所述INSR突变是杂合突变；所述INSR突变的突变位置是chr19-7132208，位于外显子14，而且所述突变的碱基变化是c.2803TC。

2.一种针对妊娠糖尿病致病基因INSR突变的基因检测试剂，其特征在于：包括核苷酸序列分别为SEQ ID No.1、SEQ ID No.2、SEQ ID No.3和SEQ ID No.5的引物；所述INSR突变是杂合突变；所述INSR突变的突变位置是chr19-7132208，位于外显子14，而且所述突变的碱基变化是c.2803TC。

3.一种针对妊娠糖尿病致病基因INSR突变的基因检测的高通量检测试剂盒，其特征在于：包括权利要求1或2所述的试剂。

4.如权利要求1或2所述的一种针对妊娠糖尿病致病基因INSR突变的基因检测试剂在制备妊娠糖尿病鉴定、评估或辅助治疗的试剂或试剂盒中的应用。

5.如权利要求1或2所述的一种针对妊娠糖尿病致病基因INSR突变的基因检测试剂应用于妊娠糖尿病致病基因INSR突变的基因检测的方法，其特征在于：包括以下步骤：

步骤1：提取检测对象的基因组DNA，所述基因组DNA样本是从妊娠糖尿病患者血浆中分离的；

步骤2：对提取的基因组DNA进行定量，并取3μg建立文库；

步骤3：对文库进行定量操作；

步骤4：上机测序，所述上机测序通过二代测序平台进行；

步骤5：通过对所得测序数据与人类基因组的参考序列进行对比，最终对所测基因的每个突变位点情况进行分析，得到致病突变相关信息。

6.如权利要求5所述的一种针对妊娠糖尿病致病基因INSR突变的基因检测方法，其特征在于：所述步骤2中建立文库的具体步骤如下：

步骤2.1：将基因组DNA进行片段化；

步骤2.2：将片段化的基因组DNA进行末端修复和3'末端添加碱基A；

步骤2.3：将3'末端添加碱基A的产物连接扩增接头，以便进行有效连接产物的富集；

步骤2.4：采用SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2所示的引物将连接产物进行PCR扩增，富集有效产物；

步骤2.5：使用探针对富集的模板中的目标区域进行捕获，其中，探针包括捕获INSR的探针，捕获方法为液相探针捕获或固相芯片杂交捕获；

步骤2.6：将捕获的目标片段分离；

步骤2.7：采用SEQ ID NO.3和SEQ ID NO.4所示的引物扩增目标片段，同时加上完整接头，获得捕获文库。

7.如权利要求5所述的一种针对妊娠糖尿病致病基因INSR突变的基因检测方法，其特征在于：所述步骤1中的提取方法包括纯化柱纯化、磁珠纯化或酚氯仿提取。

8.如权利要求5所述的一种针对妊娠糖尿病致病基因INSR突变的基因检测方法，其特征在于：所述步骤2，步骤3中的定量采取的方法包括基于荧光定量原理的定量装置定量或电泳法。

9.如权利要求6所述的一种针对妊娠糖尿病致病基因INSR突变的基因检测方法，其特征在于：所述步骤2.1中对DNA进行片段化的方法包括超声破碎、转座酶酶切或限制性内切酶酶切。