[发明专利]一种乙肝病毒表面抗原检测试剂盒及其制备方法

说明书

本发明属于生物医药和免疫学检测技术领域，公开了一种乙肝病毒表面抗原检测试剂盒及其制备方法。所述检测试剂盒包括：包被有HBsAg单克隆抗体的包被板、底物液、酶标HBsAg多克隆抗体溶液、阴性对照、阳性对照、浓缩洗涤液和终止液；所述包被板中采用包被缓冲液对HBsAg单克隆抗体进行稀释，所述HBsAg单克隆抗体与包被缓冲液的体积比为1：(1500‑2500)；所述酶标HBsAg多克隆抗体溶液中采用酶标稀释液对酶标HBsAg多克隆抗体进行稀释，所述酶标HBsAg多克隆抗体与酶标稀释液的体积比为1：(800‑1200)。所述检测试剂盒具有灵敏性高，特异性好和重复性强的突出优势，可满足定性检测人血清或血浆中乙肝病毒表面抗原的实际需求。

技术领域

本发明属于生物医药和免疫学检测技术领域，尤其涉及一种乙肝病毒表面抗原检测试剂盒及其制备方法。

背景技术

乙肝病毒(乙型肝炎病毒，HBV)是致人乙型肝炎的病原体，是目前世界上传染最广泛的致命病毒之一，乙型肝炎病毒的感染已全世界最重要的公共卫生问题之一。由于目前还没有治疗乙型肝炎的有效手段，因此疫苗接种、早期检测诊断是预防乙型肝炎的重点。

乙型肝炎的病原学诊断，最常用的是乙肝病毒血清标志物(HBVM)的检测。HBVM主要包括七种血清标志物：乙肝表面抗原、乙肝表面抗体、乙肝核心抗体、乙肝e抗原、乙肝e抗体、HBV-DNA及DNA多聚酶。通过检测HBVM可以间接的多角度了解患者HBV感染、复制以及病情恢复情况。在现有的检测HBVM的众多方法中，ELISA(酶联免疫法)因其原理简单、使用方便和价格便宜的特性，已成为国内外应用的较为广泛的一种方法。

乙肝表面抗原(HBsAg)是乙肝病毒的外壳蛋白，本身不具有传染性，但它的出现常伴随乙肝病毒的存在，一般是在感染乙肝病毒1-2周之后出现，意味着乙肝病毒的感染。它可存在于患者的血液、唾液、乳汁、汗液、泪水、鼻咽分泌物、精液及阴道分泌物中。

然而，由于现有市面上的乙肝表面抗原相关检测产品的检测效果仍有所不足，易出现假阳性或假阴性的现象。因此，希望提出一种灵敏度更高，特异性更好且重复性好的乙肝病毒表面抗原检测产品。

发明内容

本发明旨在至少解决上述现有技术中存在的技术问题之一。为此，本发明提出一种乙肝病毒表面抗原检测试剂盒及其制备方法，所述检测试剂盒具有灵敏性高，特异性好和重复性强的突出优势，可满足定性检测人血清或血浆中乙肝病毒表面抗原的实际需求。

本发明提供了一种乙肝病毒表面抗原检测试剂盒，包括：包被有HBsAg单克隆抗体的包被板、底物液、酶标HBsAg多克隆抗体溶液、阴性对照、阳性对照、浓缩洗涤液和终止液；

所述包被板中采用包被缓冲液对HBsAg单克隆抗体进行稀释，所述HBsAg单克隆抗体与包被缓冲液的体积比为1：(1500-2500)；

所述酶标HBsAg多克隆抗体溶液中采用酶标稀释液对酶标HBsAg多克隆抗体进行稀释，所述酶标HBsAg多克隆抗体与酶标稀释液的体积比为1：(800-1200)。

本发明所述检测试剂盒采用双抗体夹心法原理(ELISA)检测人血清或血浆中的乙肝病毒表面抗原(HBsAg)。首先将纯化的HBSAg单克隆抗体包被到微孔板，并保持其免疫活性，制得包被板。在测定时，HBSAg单克隆抗体可与样本中的HBsAg特异性结合，然后加入辣根过氧化物酶标记的HBsAg多克隆抗体，酶标记的HBsAg多克隆抗体与HBsAg特异性结合，最终形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，用洗涤的方法使形成的复合物与其他物质分开，最后结合在固相载体上的辣根过氧化物酶的量与样本中受检物质的量成一定的比例。加入酶反应的底物(底物液)后，底物被酶催化变为有色产物，产物的量与样本中受检物质的量直接相关，最后根据颜色反应的深浅来判断受检样本中是否含有HBSAg。