[发明专利]一种乙肝病毒表面抗原检测试剂盒及其制备方法

权利要求书

1.一种乙肝病毒表面抗原检测试剂盒，其特征在于，包括：包被有HBsAg单克隆抗体的包被板、底物液、酶标HBsAg多克隆抗体溶液、阴性对照、阳性对照、浓缩洗涤液和终止液；所述包被板中采用包被缓冲液对HBsAg单克隆抗体进行稀释，所述HBsAg单克隆抗体与包被缓冲液的体积比为1：(1500-2500)；

所述酶标HBsAg多克隆抗体溶液中采用酶标稀释液对酶标HBsAg多克隆抗体进行稀释，所述酶标HBsAg多克隆抗体与酶标稀释液的体积比为1：(800-1200)。

2.根据权利要求1所述的乙肝病毒表面抗原检测试剂盒，其特征在于，所述酶标HBsAg多克隆抗体为采用碘酸钠-乙二醇法对HBsAg多克隆抗体进行辣根过氧化物酶的标记。

3.根据权利要求1所述的乙肝病毒表面抗原检测试剂盒，其特征在于，所述包被缓冲液为10mmol/L的Tris-HCl缓冲液，pH＝7.9-8.1。

4.根据权利要求1所述的乙肝病毒表面抗原检测试剂盒，其特征在于，所述酶标稀释液包括以下重量份的组分：

所述酶标稀释液的pH＝7.3-7.5。

5.根据权利要求1所述的乙肝病毒表面抗原检测试剂盒，其特征在于，所述浓缩洗涤液为含20％NaCl、0.5％KCl和3.0％Tween-20的0.25mmol/L磷酸盐缓冲液，pH＝6.0-6.5。

6.根据权利要求1所述的乙肝病毒表面抗原检测试剂盒，其特征在于，所述终止液为1mol/L的H₂SO₄溶液。

7.根据权利要求1所述的乙肝病毒表面抗原检测试剂盒，其特征在于，所述底物液包括底物A液和底物B液；所述底物A液为含0.6g/L过氧化脲的10mmol/L柠檬酸-醋酸钠缓冲液；所述底物B液为含0.042％TMB、0.3％丙酮、4％无水乙醇、0.3g/L EDTA-Na₂、3％甘油的10mmol/L柠檬酸溶液。

8.根据权利要求1所述的乙肝病毒表面抗原检测试剂盒，其特征在于，所述阴性对照为采用阴性对照稀释液进行稀释后的阴性对照血清，所述阴性对照稀释液为含小牛血清、甘油、叠氮钠和果绿的磷酸盐缓冲溶液，所述阴性对照的吸光值≤0.1；

所述阳性对照为采用阳性对照稀释液进行稀释后的阳性对照血清，所述阳性对照稀释液为含小牛血清、甘油、ProClin300和胭脂红的磷酸盐缓冲溶液，所述阳性对照的吸光值≥0.8。

9.权利要求1-8中任一项所述的乙肝病毒表面抗原检测试剂盒的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)包被：将HBsAg单克隆抗体用包被缓冲液稀释后，按95-105μL/孔的用量添加至微孔板的孔内，于18-26℃吸附20-30h，扣干；

(2)封闭：用含0.25％酪蛋白、5％蔗糖、2％液体明胶、0.02％NaN₃的10mmol/L、pH为7.3-7.5的磷酸盐缓冲液作为封闭液，以140-160μL/孔的用量添加至微孔板的孔内，于18-26℃封闭16-26h；

(3)干燥及封板：弃去封闭液，经干燥处理后密封，制得包被有HBsAg单克隆抗体的包被板；

(4)配置并分装底物液、酶标HBsAg多克隆抗体溶液、阴性对照、阳性对照、浓缩洗涤液和终止液，经组装，得到乙肝病毒表面抗原检测试剂盒。

10.权利要求1-8中任一项所述的乙肝病毒表面抗原检测试剂盒的使用方法，其特征在于，包括以下步骤：

S1、配置洗涤液：将浓缩洗涤液用蒸馏水或去离子水作1：25稀释；

S2、取出包被板，加入待测样品50μL/孔，同时设阴、阳性对照及空白对照各2孔，阴、阳性对照孔分别加入相应对照血清50μL，空白对照孔加入100μL洗涤液，混匀；覆盖封板胶后，置37℃避光温育30min；

S3、不洗板，直接每孔内加入50μL酶标HBsAg多克隆抗体溶液，混匀，覆封板胶后，置37℃避光温育30min；

S4、洗板：用洗涤液洗板5次，每次静置1min，扣干；

S5、显色和终止：加底物液，于37℃避光显色10min后，加入终止液50μL/孔；

S6、测定：用酶标仪450mm或450nm/630nm以空白对照孔校零，测各孔吸光值；

S7、结果分析与判定：临界值cut-off＝2.1×阴性对照的平均吸光值，当阴性对照的平均吸光值＜0.05时，按0.05计算；当待测样品的吸光值＜Cut-off，判断为阴性；当待测样品吸光值≥Cut-off，判断为阳性。