[发明专利]一种尿液幽门螺杆菌抗体检测试剂盒及其制备方法

说明书

本发明公开了一种尿液幽门螺杆菌抗体检测试剂盒及其制备方法。该试剂盒包括位于底板上的试剂条，该试剂条从加样端开始依次为样品垫、荧光微球结合垫、硝酸纤维素膜、吸水垫；所述样品垫上包被有生物素化幽门螺杆菌抗原B；所述荧光微球结合垫上包被有时间分辨荧光微球标记的抗人IgG与时间分辨荧光微球标记的幽门螺杆菌抗原A；所述硝酸纤维素膜靠近荧光微球结合垫的一端设包被有亲和素的检测线；所述硝酸纤维素膜靠近吸水垫的一端设包被有羊抗鼠IgG的质控线。本发明完成检测信号的三重放大，提高了试剂的灵敏度。本发明实现了从尿液中对幽门杆菌抗体进行检测，具有取样方便、完全无创、检测灵敏度高的优点。

技术领域

本发明属于生物检测的技术领域，具体涉及一种尿液幽门螺杆菌抗体检测试剂盒及其制备方法。

背景技术

幽门螺旋杆菌感染的诊断方法分为侵入性和非侵入性两大类，侵入式检查是基于内窥镜和胃粘膜活检而完成，胃镜下取胃粘膜组织进行检查，检查方法有快速尿素酶实验，直接涂片、组织学检查、细菌培养和分子生物学检测（幽门螺旋杆菌分型和基因突变检测）；非侵入性幽门螺旋杆菌检测方法有尿素呼气实验、粪便幽门螺旋杆菌抗原检测和幽门螺旋杆菌血清学抗体试验。

HP（幽门螺杆菌）感染是慢性活动性胃炎、消化性溃疡、胃黏膜相关淋巴组织淋巴瘤的病因，更是胃癌的主要致病因素。因此，HP是迄今为止引发胃部恶性肿瘤最重要风险因子，其中腺癌是最常见类型，约占90% 。1994年世界卫生组织/国际癌症研究机构 （WHO/IARC） 将HP定为Ⅰ类致癌原。而在我国，幽门螺杆菌的感染率约为60%。

目前市场上常见的是检测血清（或血浆）中的幽门螺旋杆菌抗体，但是由于检测样本的特殊性，导致这种检测手段必须在医院完成，并不适用于普遍性筛查。对于年纪较小的儿童而言，采血会产生一定的抗拒心理，加大采样的难度。

研究资料表明，在尿液样本中同样存在幽门螺杆菌抗体，且与血清检测相比具有高度的一致性。而检测尿液中的幽门螺旋杆菌抗体，与血液检测相比，其最大的优势在于检测样本的易获得性，且可以随时随地取样并进行检测，实现家庭自测，方便用于幽门螺杆菌的普遍性筛查。

尿液幽门螺杆菌抗体检测的难点，在于尿液中的抗体含量极低，约为血清中含量的百分之一左右。因此，对于尿液检测，对试剂提出了极高的反应灵敏度。目前对于幽门螺杆菌抗体的检测，只能用于血液样本的检测，而没有尿液检测的产品。

时间分辨荧光免疫分析法是目前与化学发光、电化学发光并驾齐驱的三种超敏免疫分析方法之一。其原理是采用较长荧光半衰期的稀土离子作标记物，由于这种标记物Stokes位移大(＞150nm)且荧光寿命比本底物质荧光寿命高5～6个数量级，因此，测定时只要延缓测量时间，待本底物质的荧光充分衰减后再测定标记物的信号就可有效地消除各种非特异性荧光的干扰，获得很高的灵敏度。

时间分辨荧光微球(Time Resolved Fluorescent Microsphere)是采用时间分辨荧光染料与苯乙烯一起发生共聚而制备出来的一种特殊的功能微球，每个微球中可包裹成千上万个荧光分子，大大提高了荧光的标记效率，有效提高了分析灵敏度。荧光微球能够用于免疫检测是因为其表面带有功能基团（羧基或羰基），能够和抗原（抗体）进行偶联形成化学键，从而得到复合物用于检测。和胶体金的结合机制（静电吸引）的产物相比，化学键的结合产物的稳定性高，而且能降低位阻效应。更为重要的是由于微球包埋的稀土离子已经过了螯合，无需解离增强步骤，因此从根本上解决了传统的DELFIA法（时间荧光分辨法）只能在液相中而不能在固相界面反应的问题，从而解决了将时间分辨荧光应用于免疫层析平台的技术瓶颈。

将时间分辨荧光微球代替代胶体金作为示踪物，在此基础上开发出相应的免疫层析产品，其灵敏度高于普通胶体金或有色乳胶免疫层析方法1-3个数量级。