[发明专利]HMGB1在评估非小细胞肺癌病情和临床疗效方面的应用

说明书

本发明公开一种用于评估非小细胞肺癌病情和临床疗效的生物学标志物，所述生物学标志物为高迁移率族蛋白B1(HMGB1)。还公开了一种用于评估非小细胞肺癌病情和临床疗效的试剂盒及其使用方法，包括枸橼酸钠抗凝管、Trizol^TM试剂、逆转录试剂盒、HMGB1正向及反向引物、GAPDH正向及反向引物、裂解缓冲液、聚丙烯酰胺凝胶、PVDF膜、脱脂奶粉、兔抗人HMGB1单克隆抗体、辣根过氧化物酶(HRP)标记的羊抗兔IgG、人HMGB1酶联免疫吸附试验(ELISA)试剂盒、样品稀释液、POD‑溶剂、底物溶液、终止液。本发明发现HMGB1在非小细胞肺癌(NSCLC)进展过程中起重要作用，在NSCLC的诊断、病情和疗效的评估中有应用前景。

技术领域

本发明属于生物医疗领域，具体涉及HMGB1在评估非小细胞肺癌病情和临床疗效方面的应用。

背景技术

肺癌是严重威胁人类生存的主要恶性肿瘤之一。全球范围内，肺癌发病率与死亡率在男性人群中均处于各种恶性肿瘤的首位；女性人群中，肺癌的发病率位居第四，而死亡率高居第二。非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)占所有肺癌病例的85％，NSCLC主要包括腺癌和鳞状细胞癌两种组织学类型。尽管有多种治疗手段，如手术、化学疗法和靶向疗法等，但NSCLC患者的5年生存率仅为15％。NSCLC的高死亡率部分原因是肿瘤细胞的侵袭和转移，另一部分原因是缺乏有效的早期检测及评估预后的手段。因此，鉴定新的肿瘤生物标记物在NSCLC的临床诊断、病情评估及预后评估过程中显得尤为重要。

高迁移率族蛋白B1(high mobility group box 1,HMGB1)是一种非组蛋白染色质结合蛋白，在真核细胞中广泛存在，其蛋白结构包含两个同源的DNA结合结构域(A和B盒)和一个C末端。细胞核内的HMGB1可以参与基因转录、DNA复制和基因表达调节，而释放到细胞外的HMGB1在炎症和肿瘤发生发展过程中起重要作用。研究表明，HMGB1在多种恶性肿瘤组织中高表达，与肿瘤细胞的增殖、侵袭和转移关系非常密切。近年来关于HMGB1在NSCLC中表达的研究仍存在争议。

发明内容

发明目的：针对现有技术中存在问题或不足，本发明提供HMGB1在评估非小细胞肺癌病情和临床疗效方面的应用。

为实现上述发明目的，本发明的实施例提供一种用于评估非小细胞肺癌病情和临床疗效的生物学标志物，其特征在于，所述生物学标志物为HMGB1。

本发明的实施例还提供一种用于评估非小细胞肺癌病情和临床疗效的试剂盒，其特征在于，包括用于采集血浆的3.2％枸橼酸钠抗凝管、用于实时定量逆转录聚合酶链反应(qRT-PCR)检测的Trizol^TM试剂、逆转录试剂盒、HMGB1正向及反向引物、GAPDH正向及反向引物、用于Western blot方法检测的含蛋白酶抑制剂的裂解缓冲液、10％聚丙烯酰胺凝胶、PVDF膜、5％脱脂奶粉、兔抗人HMGB1单克隆抗体、辣根过氧化物酶(HRP)标记的羊抗兔IgG、用于酶联免疫吸附试验的人HMGB1 ELISA试剂盒、样品稀释液、POD-溶剂、底物溶液、终止液。

优选的，所述底物溶液包括A液和B液。

本发明的实施例另外还提供一种使用试剂盒进行非小细胞肺癌病情和临床疗效的评估方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)组织和血浆标本收集；(2)qRT-PCR方法检测肺癌组织和癌旁组织的HMGB1 mRNA水平；(3)Western blot方法检测肺癌组织和癌旁组织的HMGB1蛋白水平：(4)ELISA方法检测血浆HMGB1水平。

优选的，所述步骤(1)组织和血浆标本收集，具体包括以下过程：

(1-1)NSCLC患者手术后，收集肺癌肿瘤组织和癌旁组织距离癌组织边缘5cm，且病理证实为正常肺组织；-80℃保存；