[发明专利]一种促进谷氨酸棒状杆菌生产L-苹果酸的方法

说明书

一种促进谷氨酸棒状杆菌生产L‑苹果酸的方法，属于生物工程领域；包括以下步骤：S1，取谷氨酸棒状杆菌，接种到种子培养基中进行培养；所述种子培养基包括葡萄糖，蛋白胨，酵母粉，氯化钠；S2，将种子液接种到发酵培养基中，并加入碳源和氮源，得到发酵液；S3，将发酵液稀释，利用高效液相色谱进行L‑苹果酸的测定。本发明的一种促进谷氨酸棒状杆菌生产L‑苹果酸的方法，能提高L‑苹果酸的转化率和产量；碳酸氢钾50g/L、尿素为氮源、碳氮比为0.9：1，能明显提高L‑苹果酸的产量。

技术领域

本发明属于生物工程领域，具体涉及一种促进谷氨酸棒状杆菌生产L-苹果酸的方法。

背景技术

谷氨酸棒状杆菌(Corynebacterium glutamicum)属于放线菌纲棒状杆菌属，是一种非致病、无芽孢、兼性厌氧、生长快速的革兰氏阳性菌。谷氨酸棒状杆菌通过工程改造可以用来生产苹果酸。

L-苹果酸是一种四碳酸，被美国能源部列为12种高附加值的平台化合物之一，其口感接近天然苹果的酸味，属于新一代的食品酸味剂，L-苹果酸能够直接参与人体新陈代谢，能降低抗癌药物的毒副作用，在食品、医药等工业中有着广泛的应用。

谷氨酸棒状杆菌是近四十年来全球氨基酸发酵工业的主要生产菌，通过对谷氨酸棒状杆菌进行遗传重组改造和培养条件优化，可以提高L-苹果酸的产量和转化率。

发明内容

为了克服现有技术的不足，本发明的目的在于提供一种促进谷氨酸棒状杆菌生产L-苹果酸的方法，提高L-苹果酸的转化率，大幅提高L-苹果酸的产量。

本发明的目的采用如下技术方案实现：

一种促进谷氨酸棒状杆菌生产L-苹果酸的方法，包括以下步骤：

S1，取谷氨酸棒状杆菌，接种到种子培养基中进行培养；所述种子培养基包括葡萄糖，蛋白胨，酵母粉，氯化钠；

S2，将种子液接种到发酵培养基中，并加入碳源和氮源，得到发酵液；

S3，将发酵液稀释，利用高效液相色谱进行L-苹果酸的测定。

进一步地，步骤S1中，培养温度为30℃，pH值为7.0，培养时间为8-16h。

进一步地，步骤S2中，所述发酵培养基为硫酸铵培养基、NaAce培养基和CGXⅡ培养基中的一种。

进一步地，所述硫酸铵培养基由以下组分组成：葡萄糖50g/L，NaAce 5g/L，KH₂PO₄1.5g/L，MgSO₄·7H₂O 0.5g/L，(NH₄)₂SO₄ 5g/L，CaCl₂ 0.2g/L；

NaAce培养基由以下组分组成：葡萄糖20g/L，NaAce 5g/L，KH₂PO₄ 0.75g/L，K₂HPO₄0.75g/L，(NH₄)₂SO₄ 5g/L，MgSO₄·7H₂O 0.5g/L，CaCl₂ 0.2g/L，MnSO₄·4H₂O 0.02g/L，FeSO₄·7H₂O 0.005g/L，维生素H 0.2mg/L，维生素B10.2mg/L；