[发明专利]将诱导多能干细胞定向分化为内耳毛细胞样细胞的方法

权利要求书

1.一种诱导多能干细胞定向分化方法在获得内耳毛细胞样细胞中的应用，其特征在于，通过以下步骤实现：

（1）将iPSC接种至Laminin包被的培养板，使用内耳祖细胞培养基培养10-12天，所述祖细胞培养基是在DMEM/F12培养基中添加体积百分比为1%的 N2 supplement，2%的B27supplement，500×的0.2%的Normocin，终浓度为1mmol/L的丙酮酸钠，50ng/mL的FGF3，50ng/mL的FGF10得到的培养基，培养条件均为37℃，5% CO₂湿润环境的恒温培养箱；

（2）再将细胞接种至含灭活的鸡胚椭圆囊细胞的明胶包被培养板，使用内耳毛细胞培养基培养14-28天，获得成熟的内耳毛细胞样细胞，所述内耳毛细胞培养基是由DMEM/F12培养基中添加体积百分比为1%的 N2 supplement，2%的B27 supplement，500×的0.2%的Normocin，终浓度为1mmol/L的丙酮酸钠，1μmol/L的全反式维甲酸，20ng/mL的EGF得到的培养基；所述明胶包被培养板的方法为：在PBS溶液中添加质量体积分数为0.2%的明胶，高压灭菌后，取适宜体积加入培养板覆盖培养底面，37℃静置0.5小时后弃去溶液。

2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，步骤（2）所述鸡胚椭圆囊细胞灭活方法为，将鸡胚椭圆囊细胞用添加终浓度为2μg/mL的丝裂霉素C的DMEM培养基培养3小时，PBS漂洗细胞，获得灭活的鸡胚椭圆囊细胞。