[发明专利]一种海洋微拟球藻靶向表观基因组遗传调控方法有效
| 申请号： | 202110244582.8 | 申请日： | 2021-03-05 |
| 公开（公告）号： | CN113846019B | 公开（公告）日： | 2023-08-01 |
| 发明（设计）人： | 魏力 | 申请（专利权）人： | 海南师范大学 |
| 主分类号： | C12N1/13 | 分类号： | C12N1/13;C12N15/62;C12N15/79;C12R1/89 |
| 代理公司： | 北京中济纬天专利代理有限公司 11429 | 代理人： | 于跃 |
| 地址： | 571158 海*** | 国省代码： | 海南;46 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 海洋 微拟球藻 靶向 表观 基因组 遗传 调控 方法 | ||
1.一种海洋微拟球藻靶向表观基因组遗传调控方法，其特征在于：将含有经海洋微拟球藻密码子优化Cas9失活蛋白、表观遗传修饰效应蛋白M3M14和gRNA靶基因引导序列的载体导入微拟球藻获得突变体，突变株经培养后实现对靶基因的表观基因组编辑，从而定向提高靶基因的转录水平；
所述载体以pNOC-ARS-CRISPR作为骨架，简称骨架载体；所述骨架载体Ribi双向启动子一端依次连接dCas9蛋白、表观遗传修饰的特异序列SunTag序列和表观遗传修饰效应蛋白M3M14，其驱动dCas9蛋白和表观遗传修饰蛋白M3M14融合表达；另一端连接gRNA靶基因引导序列，其驱动gRNA表达；潮霉素抗性基因位于骨架载体LDSP启动子下游，由LDSP驱动表达。
2.按权利要求1所述的方法，其特征在于：所述gRNA靶基因引导序列以碳酸酐酶g6125为靶基因设计获得。
3.按权利要求1-2任一项所述的方法，其特征在于：所述载体为SEQ ID NO:1所示，其中，密码子优化的dCas9蛋白的碱基为SEQ ID NO:1中从2404bp到6504bp，密码子优化的表观遗传修饰效应蛋白M3M14为SEQ ID NO:1中从7447bp到8139bp，密码子优化的抗性选择标记基因为SEQ ID NO:1中从10545bp到11570bp，密码子优化的增强表观遗传编辑的特异序列为SEQ ID NO:1中从6682bp到7286bp。
4.按权利要求3所述的方法，其特征在于：将所述突变株经培养后实现对碳酸酐酶g6125的表观基因组编辑，而后在空气水平CO2浓度380-400ppm下培养，光强控制在50±10μmol/m2/s，通气速率在100±5ml/min条件下培养，从而实现碳酸酐酶编码RNA的m6A甲基化的定向激活，实现其靶基因表观基因组的遗传调控。
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