[发明专利]一种牙髓干细胞冻存保护液和牙髓干细胞冻存方法

说明书

本发明的目的在于提供一种牙髓干细胞冻存保护液和牙髓干细胞冻存方法，属于干细胞冻存技术领域。本发明所提供的保护液包括如下组分：40%DMEM/F12，50%FBS，10%DMSO，2.5mg/ml‑10mg/ml海雹菜多糖。本发明的有益效果在于，使用本发明冻存保护液进行牙髓干细胞冻存时，不仅可以有效的维持牙髓干细胞的活性，而且可以使牙髓干细胞具有更好的干性和成骨能力。

技术领域

本发明属于干细胞冻存技术领域，尤其涉及一种牙髓干细胞冻存保护液和牙髓干细胞冻存方法。

背景技术

干细胞是一类具有自我更新和多向分化潜能的细胞。其中，牙髓干细胞是来源于牙髓腔内软组织的一类干细胞，其具有良好的增殖和分化能力。由于牙髓干细胞具有采集方便，来源丰富，具有多向分化潜能，免疫原性低等优点，因此其在再生医学和组织工程修复中被广泛的应用。

伴随着干细胞的广泛应用，干细胞的冻存问题也逐渐成为了研究的热点。目前，牙髓干细胞主要用于成骨分化来修复牙齿，但是，目前尚无一种干细胞冻存液专门用于保存牙髓干细胞使其保持活性的同时，更好的保持其干性和成骨能力。

海雹菜是蓝藻门,藻殖段纲,念珠藻目,鞭枝藻科,海雹菜属的一种藻类，目前常用于食用或是治疗水肿。当前，尚无关于海雹菜多糖用于牙髓干细胞冻存液的相关内容。

发明内容

本发明的目的在于提供一种专用于牙髓干细胞的一种牙髓干细胞冻存保护液和牙髓干细胞冻存方法。

为实现上述目的，本发明提供了一种牙髓干细胞冻存保护液，所述保护液包括如下组分：40% DMEM/F12，50% FBS，10% DMSO，2.5mg/ml-10mg/ml海雹菜多糖。

优选地，所述保护液包括如下组分：40% DMEM/F12，50% FBS，10% DMSO，5mg/ml海雹菜多糖。

优选地，所述海雹菜多糖的制备方法包括如下步骤：

（1）将海雹菜洗净烘干，使用粉碎机进行粉碎，得到海雹菜粉末；

（2）称取一定量的海雹菜粉末，加入20倍量的水，浸泡24h；

（3）过滤除去残渣后，将上清液置于离心机中，4000r/min离心20min，收集上清；

（4）使用旋转蒸发器将上清加压浓缩至原体积10%，加入3倍量的95%乙醇，醇沉12h；

（5）置于离心机中,4000r/min离心20min，去除上清，得到海雹菜粗多糖；

（6）加水溶解海雹菜粗多糖后加入Sevage试剂脱蛋白，4000r/min离心20min，重复3次，减压浓缩，冷冻干燥得到海雹菜多糖。

此外，本发明提供了一种用于牙髓干细胞冻存保护液的海雹菜多糖，所述海雹菜多糖的制备方法包括如下步骤：

（1）将海雹菜洗净烘干，使用粉碎机进行粉碎，得到海雹菜粉末；

（2）称取一定量的海雹菜粉末，加入20倍量的水，浸泡24h；

（3）过滤除去残渣后，将上清液置于离心机中，4000r/min离心20min，收集上清；

（4）使用旋转蒸发器将上清加压浓缩至原体积10%，加入3倍量的95%乙醇，醇沉12h；

（5）置于离心机中,4000r/min离心20min，去除上清，得到海雹菜粗多糖；

（6）加水溶解海雹菜粗多糖后加入Sevage试剂脱蛋白，4000r/min离心20min，重复3次，减压浓缩，冷冻干燥得到海雹菜多糖；

所述海雹菜多糖在牙髓干细胞冻存保护液中用于维持牙髓干细胞活性；