[发明专利]一种牙髓干细胞冻存保护液和牙髓干细胞冻存方法

权利要求书

1.一种牙髓干细胞冻存保护液，其特征在于，所述保护液包括如下组分：40% DMEM/F12，50% FBS，10% DMSO，2.5mg/ml-10mg/ml海雹菜多糖；

所述海雹菜多糖的制备方法包括如下步骤：

（1）将海雹菜洗净烘干，使用粉碎机进行粉碎，得到海雹菜粉末；

（2）称取一定量的海雹菜粉末，加入20倍量的水，浸泡24h；

（3）过滤除去残渣后，将上清液置于离心机中，4000r/min离心20min，收集上清；

（4）使用旋转蒸发器将上清加压浓缩至原体积10%，加入3倍量的95%乙醇，醇沉12h；

（5）置于离心机中,4000r/min离心20min，去除上清，得到海雹菜粗多糖；

（6）加水溶解海雹菜粗多糖后加入Sevage试剂脱蛋白，4000r/min离心20min，重复3次，减压浓缩，冷冻干燥得到海雹菜多糖。

2.根据权利要求1所述的保护液，其特征在于，所述保护液包括如下组分：40% DMEM/F12，50% FBS，10% DMSO，5mg/ml海雹菜多糖。

3.一种用于牙髓干细胞冻存保护液的海雹菜多糖，其特征在于，所述海雹菜多糖的制备方法包括如下步骤：

（1）将海雹菜洗净烘干，使用粉碎机进行粉碎，得到海雹菜粉末；

（2）称取一定量的海雹菜粉末，加入20倍量的水，浸泡24h；

（3）过滤除去残渣后，将上清液置于离心机中，4000r/min离心20min，收集上清；

（4）使用旋转蒸发器将上清加压浓缩至原体积10%，加入3倍量的95%乙醇，醇沉12h；

（5）置于离心机中,4000r/min离心20min，去除上清，得到海雹菜粗多糖；

（6）加水溶解海雹菜粗多糖，加入Sevage试剂脱蛋白，4000r/min离心20min，重复3次，减压浓缩，冷冻干燥得到海雹菜多糖；

所述海雹菜多糖在牙髓干细胞冻存保护液中用于维持牙髓干细胞活性；

所述海雹菜多糖在牙髓干细胞冻存保护液中用于维持Oct4和Sox2基因表达；

所述海雹菜多糖在牙髓干细胞冻存液中用于维持牙髓干细胞成骨能力。

4.一种用于牙髓干细胞冻存保护液的海雹菜多糖的制备方法，其特征在于，所述制备方法包括如下步骤：

（1）将海雹菜洗净烘干，使用粉碎机进行粉碎，得到海雹菜粉末；

（2）称取一定量的海雹菜粉末，加入20倍量的水，浸泡24h；

（3）过滤除去残渣后，将上清液置于离心机中，4000r/min离心20min，收集上清；

（4）使用旋转蒸发器将上清加压浓缩至原体积10%，加入3倍量的95%乙醇，醇沉12h；

（5）置于离心机中,4000r/min离心20min，去除上清，得到海雹菜粗多糖；

（6）加水溶解海雹菜粗多糖后加入Sevage试剂脱蛋白，4000r/min离心20min，重复3次，减压浓缩，冷冻干燥得到海雹菜多糖。

5.海雹菜多糖在制备牙髓干细胞活性维持剂中的应用，其特征在于，所述海雹菜多糖由以下制备方法制备得到：

（1）将海雹菜洗净烘干，使用粉碎机进行粉碎，得到海雹菜粉末；

（2）称取一定量的海雹菜粉末，加入20倍量的水，浸泡24h；

（3）过滤除去残渣后，将上清液置于离心机中，4000r/min离心20min，收集上清；

（4）使用旋转蒸发器将上清加压浓缩至原体积10%，加入3倍量的95%乙醇，醇沉12h；

（5）置于离心机中,4000r/min离心20min，去除上清，得到海雹菜粗多糖；

（6）加水溶解海雹菜粗多糖后加入Sevage试剂脱蛋白，4000r/min离心20min，重复3次，减压浓缩，冷冻干燥得到海雹菜多糖。