[发明专利]一种高效液相色谱串联质谱检测血清中脂溶性维生素的检测试剂盒及其检测方法

权利要求书

1.一种高效液相色谱串联质谱检测血清中脂溶性维生素的检测试剂盒，其特征在于，由标准样品、质控样品、内标溶液、液相色谱流动相和耗材组成；所述内标溶液由内标标准品工作液、甲醇、乙腈、异丙醇和乙酸铵组成，所述内标标准品工作液由含有VA1-d6、VD3-d6、VD2-d6、VK1-d4和VE-d6的同位素内标溶液组成；所述甲醇、乙腈和异丙醇的体积比为70~75%:15~25%:5~10%，所述乙酸铵的浓度为40~50mM；所述脂溶性维生素为维生素A、25-羟基维生素D2、25-羟基维生素D3、维生素E、维生素K1和维生素K2。

2.如权利要求1所述的检测试剂盒，其特征在于，所述内标标准品工作液与40~50mM乙酸铵的甲醇-乙腈-异丙醇溶液的体积比为1:124；所述甲醇、乙腈和异丙醇的体积比为70~75%:15~25%:5~10%；所述耗材包括低吸附96孔板。

3.如权利要求2所述的检测试剂盒，其特征在于，所述标准样品为：含有标准浓度的维生素A、25-羟基维生素D2、25-羟基维生素D3、维生素E、维生素K1和维生素K2，采用阴性空白人血清作为基质配制；所述质控样品为：含有低中高三个不同水平浓度的血清基质样品；液相色谱洗脱液包括流动相A和流动相B，流动相A为0.1%甲酸水溶液，流动相B为0.1%甲酸甲醇溶液。

4.一种高效液相色谱串联质谱检测血清中脂溶性维生素的方法，其特征在于，采用如权利要求1-3任一项所述的检测试剂盒进行检测；包括样品制备、样品前处理、样品检测；其中，所述样品前处理包括以下步骤：取50μL样品至96孔板，加入150~350μL内标溶液涡旋混匀，600~1000rpm震荡10min，离心分离，取上清液200μL于低吸附96孔板中，用高效液相色谱串联质谱检测。

5.如权利要求4所述的方法，其特征在于，内标溶液体积为250μL；质谱分析时采用分时间段采集的方式。

6.一种混合物用于制备可稳定放置两年以上，并能用于样品前处理的脂溶性维生素样品内标溶液的用途，其特征在于，所述混合物由内标标准品工作液、甲醇、乙腈、异丙醇和乙酸铵组成，所述内标标准品工作液为含有VA1-d6、VD3-d6、VD2-d6、VK1-d4和VE-d6的同位素内标溶液；所述甲醇、乙腈和异丙醇的体积比为70~75%:15~25%:5~10%，所述乙酸铵的浓度为40~50mM，所述脂溶性维生素为维生素A、25-羟基维生素D2、25-羟基维生素D3、维生素E、维生素K1和维生素K2。