[发明专利]一种提高腺相关病毒感染细胞感染效率的方法

说明书

本申请涉及一种提高腺相关病毒AAV感染细胞的感染效率的方法，其包括以下步骤：使待感染的所述细胞与DNA复制抑制剂接触，其中所述DNA复制抑制剂包括细胞周期非特异性药物和/或CDK抑制剂。本申请所述的方法可以显著提高腺相关病毒AAV感染细胞的感染效率。

技术领域

本申请涉及生物医药领域，具体的涉及一种提高腺相关病毒感染细胞感染效率的方法。

背景技术

目前，腺相关病毒AAV已经被广泛应用于基因治疗领域，可以有效感染多种器官组织。但是AAV感染细胞系的能力很弱，尤其是针对AAV3、AAV4、AAV8和AAV9等AAV血清型，这些AAV需要辅助感染腺病毒才能实现有效感染，极大地制约了AAV的应用。

因此，目前亟需提高腺相关病毒AAV感染细胞的感染效率。

发明内容

本申请提供了一种可以显著提高腺相关病毒AAV感染细胞的感染效率的方法，其包括使待感染的细胞与DNA复制抑制剂(例如细胞周期非特异性药物，和/或CDK抑制剂)接触。本申请所述的方法具有下述技术效果中的一种或多种：1)能够显著提高腺相关病毒AAV感染细胞后细胞的感染阳性率；2)能够显著提高(包含目的基因的)腺相关病毒AAV感染细胞后细胞中目的基因的mRNA表达水平；3)能够显著提高(包含目的基因的)腺相关病毒AAV感染细胞后细胞中目的基因的蛋白质表达水平。本申请还发现，不同的细胞种类、不同的DNA复制抑制剂等多种因素与所述感染效率密切相关。本申请提供了一种包含DNA复制抑制剂和细胞培养基的药物产品。所述药物产品有助于提高腺相关病毒AAV感染细胞的感染效率。

一方面，本申请提供了一种提高腺相关病毒AAV感染细胞的感染效率的方法，其包括以下步骤：使待感染的所述细胞与DNA复制抑制剂接触。

在某些实施方式中，所述接触包括体外接触。

在某些实施方式中，所述接触的时间为约0.5-约4小时。

在某些实施方式中，所述接触的温度为约30℃-约40℃。

在某些实施方式中，待感染的所述细胞与DNA复制抑制剂在细胞培养基中接触。

在某些实施方式中，所述细胞培养基包括DMEM培养基、HAM’S F12K培养基和/或FBS培养基。

在某些实施方式中，所述细胞包括：HEK293细胞、293T细胞和/或CHO-K1细胞。

在某些实施方式中，所述细胞选自下组：HEK293细胞、293T细胞和CHO-K1细胞。

在某些实施方式中，所述细胞的MOI值至少为10²。

在某些实施方式中，所述AAV的血清型包括：AAV8、AAV2、AAV5和/或AAV9。

在某些实施方式中，所述AAV的血清型选自下组：AAV8、AAV2、AAV5和AAV9。

在某些实施方式中，所述方法包括以下步骤：所述接触后，利用所述AAV感染所述细胞。

在某些实施方式中，所述感染效率的提高包括，和不与所述DNA复制抑制剂接触的所述待感染细胞的感染效率相比，与所述DNA复制抑制剂接触的所述待感染细胞的感染效率显著提高。

在某些实施方式中，所述感染效率的提高包括，和不与所述DNA复制抑制剂接触的所述待感染细胞经所述感染后表达目的基因所编码的mRNA的表达水平相比，与所述DNA复制抑制剂接触的所述待感染细胞经所述感染后表达目的基因所编码的mRNA的表达水平提高至少5倍。