[发明专利]一种高效液相色谱法的Fmoc-L-Hyp(tbu)-OH及其异构体的手性检测方法

说明书

本发明公开了一种高效液相色谱法的Fmoc‑L‑Hyp(tbu)‑OH及其异构体的手性检测方法，所述方法包括如下步骤：将正己烷和0.1％TFA的离子对溶液按一定比例配置流动相A；将异丙醇和0.1％TFA的离子对溶液按一定比例配置流动相B；注入待测溶液，以流动相A和流动相B对色谱柱进行等梯度洗脱；记录色谱图，并采用面积归一化法计算Fmoc‑Hyp(tbu)‑OH的手性纯度，该种检测方法，检测速度较快，结果准确，方法步骤简单，便于操作，具有广阔的应用前景。

技术领域

本发明涉及有机化合物的检测技术领域，具体涉及一种高效液相色谱法的Fmoc-L-Hyp(tbu)-OH及其异构体的手性检测方法。

背景技术：

羟脯氨酸(Hydroxyproline,Hyp)又名反式-4-羟基-L-脯氨酸，是胶原蛋白的主要组成成分,不属于20种常见的氨基酸。近些年来,Hyp的研究和开发已经引起医药、生化、食品及美容业等方面的广泛关注。它可以作为化妆品添加剂，具有抗氧化、抗辐射的作用；它具有减肥作用,可望成为比较理想的减肥药物；具有多种生理功能与独特的生物活性,既可作为各种软组织疾病的药物,如结缔组织受损、风湿性关节炎等,又可加快伤口愈合，以及治疗各种皮肤疾病。

Hyp分子式为C5H9NO3，分子量为131.13。通常呈结晶性粉末或白色片状，具苦味中的特殊甜味。熔点为274℃，易溶于水(25℃，36.1％)，而微溶于乙醇。羟脯氨酸有四种同分异构体，包括4-羟脯氨酸的两种异构体和3－羟脯氨酸的两种异构体。

对映异构体的分离在生物化学、医药工业和现代立体选择有机合成方面都具有十分重要的意义。含手性因素的的化学药物的对映体在人体内的药理活性、代谢过程及毒性存在显著的差异。当前手性药物的研究已成为国际新药研究的主要方向之一。绝大多数的药物由手性分子构成，两种手性分子可能具有明显不同的生物活性。药物分子必须与受体(起反应的物质)分子几何结构匹配，才能起到应有的药效，就如右手只能带右手套一样。因此，往往两种异构体中仅有一种是有效的，另一种无效甚至有害，而羟脯氨酸有四种同分异构体对手性分离的难度就更大了。

发明内容

本发明的目的在于提供一种高效液相色谱法的Fmoc-L-Hyp(tbu)-OH及其异构体的手性检测方法，以解决现有技术中缺少对Fmoc-L-Hyp(tbu)-OH及其异构体的手型检测方法的缺陷。

一种高效液相色谱法的Fmoc-L-Hyp(tbu)-OH及其异构体的手性检测方法，所述方法包括如下步骤：

将正己烷和0.1％TFA的离子对溶液按一定比例配置流动相A；

将异丙醇和0.1％TFA的离子对溶液按一定比例配置流动相B；

注入待测溶液，以流动相A和流动相B对色谱柱进行等梯度洗脱；

记录色谱图，并采用面积归一化法计算Fmoc-Hyp(tbu)-OH的手性纯度。

进一步的，所述正己烷的体积含量为60～85％，异丙醇的体积含量为15～35％，0.1％TFA的离子对溶液的体积含量均为0.02～1.5％。

进一步的，所用色谱柱包括chiralpak IC、chiralcel OD-H、chiralpak IA、chiralpak IB以及Chirobiotic R中的一种或多种。

进一步的，所述等梯度洗脱的柱温为20～50℃。

进一步的，所述等梯度洗脱的进样浓度控制在0.25～1.5mg/ml。

进一步的，所述等梯度洗脱时紫外线检测器的检测波长为210～240nm。

进一步的，所述等梯度洗脱时紫外线检测器的检测波长为220nm。

进一步的，所述等梯度洗脱时流动相流速为0.5～1.5ml/min。