[发明专利]甬甜5号甜瓜种子纯度的快速鉴定方法

说明书

本发明属于种子纯度鉴定的技术领域，提供甬甜5号甜瓜种子纯度的快速鉴定方法，该鉴定方法包括用SSR1、SSR2和SSR3三对特异性引物对甬甜5号甜瓜单株的幼苗DNA进行PCR扩增；所述SSR1、SSR2和SSR3特异性引物的序列信息分别如下：SSR1：SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2；SSR2：SEQ ID NO.3和SEQ ID NO.4；SSR3：SEQ ID NO.5和SEQ ID NO.6。本发明方法的鉴定结果准确可靠、不受环境影响，可以更好地保障甬甜5号甜瓜种子的纯度。

技术领域

本发明属于种子纯度鉴定的技术领域，具体涉及甬甜5号甜瓜种子纯度的快速鉴定方法。

背景技术

种子纯度是评价作物种子质量的重要指标，导致种子纯度不达标的原因主要有亲本纯度低、机械混杂和授粉隔离不到位等(李逸龙.种子纯度研究现状与发展.长江蔬菜.2011.18：6-10)。纯度不达标的种子一经出售使用，会给农户造成重大的经济损失，给种子生产和销售部门带来纠纷。因此，种子纯度检验是种子生产工作中必不可少的重要步骤，其也是种子生产部门需要高度重视的问题。

通常种子纯度的鉴定方法是通过观察作物的种子、植株和果实等表型性状来判断(李淑娟.种子纯度鉴定方法概述.青海大学学报.2003.21(1)：16-19)。这些依靠表型鉴定纯度的方法，通常费时费力、易受环境影响，可靠性差。而且对于差异不明显的表型特征，鉴定结果受人为因素干扰严重。现有种子纯度鉴定方法的效率和鉴定结果还有待提高。

甜瓜经济效益高，爬地栽培每亩收益5000-6000元，如果种子纯度降低会造成甜瓜异质性增强，果实品质下降、产量降低，会造成生产、贮藏和销售过程中的惨重经济损失。“甬甜5号”是宁波市农业科学研究院培育的优质、脆肉的新甜瓜品种，并且获得了植物新品种权(CNA20121325.8)，其白皮橙肉、口感细腻，具有品质优、易栽培、适应性广的优点。现已辐射推广至浙江、江苏、山东、广东、新疆等地，应用前景广阔，连续列为浙江省主导瓜菜品种。随着“甬甜5号”种植面积不断扩大，种子销售供应不求。常规表型的种子鉴定方法，效率低和准确性差，难以满足快速大量制种和销售过程中的种子纯度检测要求。

SSR(Simple Sequence Repeat)分子标记技术操作简单，重复性好，符合作物种子纯度鉴定准则，已经在甜瓜上使用，例如，柳剑丽等.利用SSR标记鉴定甜瓜杂交种的种子纯度.分子植物育种.2006.32(7)：19-22；方小雪等.利用SSR分子标记鉴定甜瓜杂交种纯度.浙江农业科学.2016.57(2)：178-181，专利ZL2014107372664公开甜瓜品种哈翠种子纯度的快速检测方法，但是甜瓜类型丰富，遗传背景复杂，不同遗传背景的亲本配制的杂交种，需要对亲本材料进行SSR分子标记筛选，才可以获得用该亲本配制的杂交种的纯度鉴定。

有鉴于此，特提出本发明申请。

发明内容

本发明提供甬甜5号甜瓜种子纯度的快速鉴定方法，所述鉴定方法包括用SSR1、SSR2和SSR3三对特异性引物对甬甜5号甜瓜单株的幼苗DNA进行PCR扩增；

所述SSR1、SSR2和SSR3特异性引物的序列信息分别如下：

SSR1：SEQ IDNO.1和SEQ ID NO.2；

SSR2：SEQ ID NO.3和SEQ ID NO.4；

SSR3：SEQ ID NO.5和SEQ ID NO.6。

作为一种实施方式，所述鉴定方法还包括用所述SSR1、SSR2或SSR3特异性引物对鉴定的不纯合亲本进行扩增、提高亲本纯度的步骤。

作为一种实施方式，当杂株表现为母本P1的多态性位点，父本P2对应位点不纯合时，用SSR1、SSR2或SSR3引物对不纯合父本P2进行扩增，剔除与P2多态性位点不同的单株。