[发明专利]自体皮肤成纤维细胞的制备方法

权利要求书

1.自体皮肤成纤维细胞的制备方法，其特征在于，方法步骤如下：

S1：切取一块人自体脸颊或耳后皮肤组织，将组织在无菌环境下完全浸泡于组织处理液中10-20min，将浸泡后的组织去除脂肪组织及结缔组织，剩余组织置于无菌培养皿中剪碎；

S2：将剪碎后的组织加入37℃预热的含Hank’s平衡盐溶液的混合酶消化液进行消化，消化结束后加入终止消化液以终止消化；

S3：将所得组织液合并至离心管中，离心，去除上清，向细胞沉淀加入细胞培养液，重悬至3-15ml作为原代细胞，后转移至培养皿培养，得到P₀成纤维细胞；

S4：将P₀代细胞接种至培养瓶中，培养结束后收集细胞，得到P1代成纤维细胞，取样并计数细胞的数量和活率。

2.根据权利要求1所述的自体皮肤成纤维细胞的制备方法，其特征在于，所述S1中组织处理液为含有0.8-1.2％双抗的0.9％生理盐水。

3.根据权利要求1所述的自体皮肤成纤维细胞的制备方法，其特征在于，所述S1中剪碎后组织的大小为0.1-0.3mm³。

4.根据权利要求1所述的自体皮肤成纤维细胞的制备方法，其特征在于，所述S2中复合酶包含如下重量份原料：dispase酶0.1-5份、DNA酶0.2-2份、胶原酶Ⅱ 0.1-3份、胶原酶Ⅳ0.1-3份、透明质酸酶0.1-3份。

5.根据权利要求1所述的自体皮肤成纤维细胞的制备方法，所述S3中离心的条件为：时间3-5min、转速1200-1800rpm。

6.根据权利要求1所述的自体皮肤成纤维细胞的制备方法，所述S3中培养的条件为：温度37℃、5％CO₂培养箱中培养。

7.根据权利要求1所述的自体皮肤成纤维细胞的制备方法，所述S3中细胞培养液为包含B-27、bFGF和EGF的DMEM/F12培养基。

8.根据权利要求7所述的自体皮肤成纤维细胞的制备方法，所述B-27、bFGF和EGF的质量比为0.3-0.7:1:1-1.5。

9.一种如权利要求1-8任一项所述方法制备的自体皮肤成纤维细胞。