[发明专利]瑞香狼毒根际土壤和根内化感物质的提取和含量检测方法

说明书

本发明涉及一种瑞香狼毒根际土壤和根内化感物质的提取方法，包括以下步骤：⑴向瑞香狼毒根际土壤样品中加入甲醇溶液，超声提取三次；经抽滤除杂、旋蒸后，即得化感物质粗提物B；⑵称取50g瑞香狼毒植株的根部，粉碎后加入甲醇，超声提取三次后旋蒸，即得化感物质粗提物F；⑶分别称取5~10mg所述化感物质粗提物B、所述化感物质粗提物F，分别加入色谱级甲醇溶液，配制成2mg/mL的溶液，并通过有机滤膜除去杂质，分别得到待测溶液C、待测溶液D。同时，本发明还公开了该瑞香狼毒根际土壤和根内化感物质的含量检测方法。本发明对瑞香狼毒根际土壤和根内化感物质提取效率高、操作简单，且具有定量检测快速灵敏以及准确等优点。

技术领域

本发明涉及植物化感物质分析技术领域，尤其涉及瑞香狼毒根际土壤和根内化感物质的提取和含量检测方法。

背景技术

瑞香狼毒为瑞香科狼毒属多年生草本植物，在中国广泛分布于甘肃、新疆、宁夏等省区。近年来，瑞香狼毒由于强大的生态适应性和高度的竞争性，目前已成为中国草地退化的标志性植物之一。研究表明，瑞香狼毒能通过根系分泌物改变根际微生物群落结构及土壤酶活性，还能产生抑制其他植物生长的化感物质，从而创造利于自身生存繁衍的土壤生态系统。因此，建立一种准确测定瑞香狼毒根际土壤及根中化感物质的方法，对于控制瑞香狼毒草地入侵，治理瑞香狼毒引起的草地退化问题具有重要意义。

现今，对于瑞香狼毒的研究多集中在药理活性、化学物质、生态学等方面，关于瑞香狼毒根际土壤及根中化感物质的提取及检测方法，目前相关研究及报道较少。对于瑞香狼毒化感物质的报道，更多的是集中在单个化感物质的提取及活性测定的实验，还未有对不同生长时期、不同盖度下根际土壤中的化感物质含量进行全面的检测，也没有对不同生长时期、不同盖度瑞香狼毒根部化感物质进行含量测定的报道。

因此，为了有效控制瑞香狼毒的入侵，亟需建立一种能对瑞香狼毒根际土壤及根中化感物质进行全面检测和合理定量分析的新方法。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是提供一种效率高、操作简单的瑞香狼毒根际土壤和根内化感物质的提取方法。

本发明所要解决的另一个技术问题是提供一种定量检测、快速灵敏及准确的瑞香狼毒根际土壤和根内化感物质的含量检测方法。

为解决上述问题，本发明所述的瑞香狼毒根际土壤和根内化感物质的提取方法，包括以下步骤：

⑴向瑞香狼毒根际土壤样品中按照每100g土样加入不少于300mL的甲醇溶液，超声提取不少于30min，重复三次；经抽滤除杂后，获得粗提溶液A；所述粗提溶液A使用旋转蒸发仪除去甲醇后，即得化感物质粗提物B；

⑵称取50g瑞香狼毒植株的根部，通过粉样机粉碎后加入150mL甲醇，超声提取30min，重复三次，得到粗提溶液E；所述粗提溶液E通过使用旋转蒸发仪除去甲醇后，即得化感物质粗提物F；

⑶分别称取5~10mg所述化感物质粗提物B、所述化感物质粗提物F，分别加入色谱级甲醇溶液，配制成2mg/mL的溶液，并通过0.22μm的有机滤膜除去杂质，分别得到待测溶液C、待测溶液D。

所述化感物质粗提物B与所述化感物质粗提物F中包含下述7种化感物质：伞形花内脂（umbelliferone）、狼毒色原酮（chamaechromone）、西瑞香素（daphnoretin）、异新狼毒素A(isoneochamaejasmin A)、新狼毒素B（neochamaejasmin B）、二氢瑞香素B（Dihydrodaphnodorin B）、7-甲氧基新狼毒素A（ 7-methoxyneochamaejasmine A ）。

各化感物质结构式如下：