[发明专利]瑞香狼毒根际土壤和根内化感物质的提取和含量检测方法

权利要求书

1.瑞香狼毒根际土壤和根内化感物质的提取和含量检测方法，包括以下步骤：

⑴向瑞香狼毒根际土壤样品中按照每100g土样加入不少于300mL的甲醇溶液，超声提取不少于30min，重复三次；经抽滤除杂后，获得粗提溶液A；所述粗提溶液A使用旋转蒸发仪除去甲醇后，即得化感物质粗提物B；

⑵称取50g瑞香狼毒植株的根部，通过粉样机粉碎后加入150mL甲醇，超声提取30min，重复三次，得到粗提溶液E；所述粗提溶液E通过使用旋转蒸发仪除去甲醇后，即得化感物质粗提物F；

⑶分别称取5~10mg所述化感物质粗提物B、所述化感物质粗提物F，分别加入色谱级甲醇溶液，配制成2mg/mL的溶液，并通过0.22μm的有机滤膜除去杂质，分别得到待测溶液C、待测溶液D；所述化感物质粗提物B与所述化感物质粗提物F中包含下述7种化感物质：伞形花内脂、狼毒色原酮、西瑞香素、异新狼毒素A、新狼毒素B、二氢瑞香素B、7-甲氧基新狼毒素A；

⑷首先采用高效液相色谱分别建立伞形花内脂、狼毒色原酮、西瑞香素、异新狼毒素A、新狼毒素B、二氢瑞香素B以及7-甲氧基新狼毒素A共计七种瑞香狼毒化感物质的标准曲线；然后采用高效液相色谱（HPLC）分别对待测溶液C、待测溶液D进行检测，通过外标法确定化感物质保留时间；最后，将化感物质含量通过比对化感物质标准曲线峰面进行换算即得；所述高效液相色谱的色谱条件如下：色谱柱：250 mm×4.6 mm、5μm粒径的Symmetry C18反相柱；流动相流速：1mL/min；流动相：A相为乙腈，B相为含0.2%乙酸的水；进样量：20μL；洗脱梯度：0~6min：20%~30% A；6~8min：30%~35% A；8~15min：35~45% A；15~18min：45~60% A；18~20min：60~80% A；20~25min：80% A。