[发明专利]一种岩藻糖转移酶8(FUT8)功能缺失细胞株的构建方法及其应用

说明书

本发明公开了一种岩藻糖转移酶8(FUT8)功能缺失细胞株的构建方法及其应用。本发明通过筛选并选取FUT8的活性位点，采用碱基编辑技术，在不引入外源蛋白、且不破坏内源蛋白整体结构的情况下，以最小的基因层面的改动，达到让构建成熟的工程细胞失去岩藻糖转移酶(FUT8)功能，从正常生产含有岩藻糖的抗体药物的宿主，转变为生产不含有岩藻糖的抗体药物的宿主，从而提高了其生产的抗体药物的产量和品质。

技术领域

本发明分子生物学领域，具体涉及一种岩藻糖转移酶8(FUT8)功能缺失细胞株的构建方法及其应用。

背景技术

治疗性抗体药物是近年来快速增长的药物研发领域。除了中和抗原的作用之外，相当数量的治疗性抗体药物(如抗肿瘤抗体药物)，在结合目标细胞之后，通过抗体依赖性的细胞介导的细胞毒作用(antibody-dependent cell-mediated cytotoxicity，ADCC)杀伤目标细胞。因此，提高治疗性抗体药物产生ADCC的能力，对于提高抗肿瘤抗体药物的药效至关重要。

研究表明：对比含有α1,6-连接的核心岩藻糖的治疗性抗体，岩藻糖缺失型糖基化修饰的治疗性抗体的ADCC增强了数十倍。然而，未经改造的工程细胞所生产的治疗性抗体，几乎全部含有岩藻糖糖基化修饰。因此，发展能够生产岩藻糖缺失型糖基化抗体的工程细胞，对于研发ADCC增强的治疗性抗体药物，具有重要的应用前景。

目前，现有技术中采取的生产岩藻糖缺失型糖基化抗体的策略主要为：通过在工程细胞中过表达N-乙酰葡糖胺转移酶III(GnTIII)，促使工程细胞合成高平分型N-乙酰葡糖胺 (bisecting GlcNAc)、低岩藻糖的抗体分子；或者通过Zinc Finger Nuclease、TALEN等基因敲除技术，降低或消除工程细胞表达岩藻糖转移酶8(FUT8)，从而使工程细胞丢失合成含岩藻糖抗体分子的能力；或者通过RNA干扰技术(RNAi)降低工程细胞表达岩藻糖转移酶 (FUT8)，从而使工程细胞失去合成含岩藻糖抗体分子的能力；或者通过类似分子生物学方法抑制岩藻糖本身的合成、转运通路。然而，这些方法的共同问题是：引入大量的外源蛋白 (如过表达GnTIII)或降低内源蛋白的表达(如敲除FUT8)，这些都可能对已经构建成熟的工程细胞带来不必要的生长压力，从而降低其生产抗体药物的产量和品质。

因此，亟需一种在不引入外源蛋白、且不破坏内源蛋白的表达的构建岩藻糖转移酶功能缺失细胞株的方法，以提高治疗性抗体药物产生ADCC，降低抗体药物的产量和品质低下的风险。

发明内容

本发明的目的在于提供一种用于构建岩藻糖转移酶8(FUT8)功能缺失细胞株的靶向序列；

本发明的另一目的在于提供一种岩藻糖转移酶8功能缺失细胞株；

本发明的另一目的在于提供上述的岩藻糖转移酶8功能缺失细胞株的构建方法；

本发明的另一目的在于提供一种鉴别上述细胞株和野生型细胞株的测序引物；

本发明的另一目的在于提供上述细胞株在制备表达抗体药物中的应用。

本发明所采取的技术方案是：

本发明的第一个方面，提供：

一种用于构建岩藻糖转移酶8功能缺失细胞株的靶向序列，该靶向序列的序列为5’ -TGTCAGACGCACTGACAAAG-3’(SEQ ID NO.1)。

该细胞株通过构建质粒和碱基编辑器转染得到；

其中，该构建质粒的序列如SEQ ID NO.3；

该碱基编辑器包括ABEmax腺嘌呤碱基编辑器、BE3胞嘧啶碱基编辑器。

ABEmax腺嘌呤碱基编辑器根据文献报道序列由上海生工生物技术有限公司全基因合成。