[发明专利]一种基于锁核酸修饰的RMA法检测CYP2C19基因多态性的试剂盒及检测方法

权利要求书

1.一种基于锁核酸修饰的RMA法检测CYP2C19基因多态性的引物探针组，其特征在于，所述引物和探针组分为两组，A组为检测CYP2C19*2和CYP2C19*3的引物对、野生型探针和突变型探针；B组为检测CYP2C19*17的引物对、野生型探针和突变型探针；其中，A组的CYP2C19*2引物和探针序列为：

正向引物：5’-AGCATTACTCCTTGACCTGTTAAACATCCGTAG-3’；

反向引物：5’-CAACCAGAGCTTGGCATATTGTATCTATACCT-3’；

野生型探针：

5’-CAAGGTTTTTAAGTAATTTGTTATGGGT(FAM-dT)CCCGGGAAA(THF)AA(BHQ1-dT)CAATGATAGT(C3spacer)-3’；

突变型探针：

5’-CAAGGTTTTTAAGTAATTTGTTATGGGT(HEX-dT)CCTGGGAAA(THF)AA(BHQ1-dT)CAATGATAGT(C3spacer)-3’；

A组的CYP2C19*3引物和探针序列为：

正向引物：5’-ATCATTTAGCTTCACCCTGTGATCCCACTTTC-3’；

反向引物：5’-CATGGCTGTCTAGGCAAGACTGTAGTATTCAA-3’；

野生型探针：

5’-TGAAAACATCAGGATTGTAAGCACCCCC(ROX-dT)GGA(THF)CCAGG(BHQ2-dT)AAGGCCAAGT(C3spacer)-3’；

突变型探针：

5’-TGAAAACATCAGGATTGTAAGCACCCCC(CY5-dT)GAA(THF)CCAGG(BHQ2-dT)AAGGCCAAGT(C3spacer)-3’。

B组CYP2C19*17的引物和探针序列为：

正向引物：5’-AGTTTCTCAAGCCCTTAGCACCAAATTCTCTG-3’；

反向引物：5’-GAACTGGGATTTGAGCTGAGGTCTTCTGATG-3’；

野生型探针：

5’-AATTTGTGTCTTCTGTTC(FAM-dT)CAAAGCA(THF)C(BHQ1-dT)CTGATGTAAGAGATA(C3spacer)-3’；

突变型探针：

5’-AATTTGTGTCTTCTGTTC(HEX-dT)CAAAGAA(THF)C(BHQ1-dT)CTGATGTAAGAGATA(C3spacer)-3’。

2.如权利要求1所述的一种基于锁核酸修饰的RMA法检测CYP2C19基因多态性的引物探针组，其特征在于，所述探针修饰有荧光基团和猝灭基团，所述猝灭基团修饰在THF 3’端的T碱基上，荧光基团修饰在SNP位点的5’端T碱基上或SNP位点互补碱基的5’端T碱基上。

3.如权利要求2所述的一种基于锁核酸修饰的RMA法检测CYP2C19基因多态性的引物探针组，其特征在于，所述荧光基团用FAM、HEX、ROX或CY5修饰，所述淬灭基团用BHQ1、BHQ2修饰。

4.如权利要求3所述的一种基于锁核酸修饰的RMA法检测CYP2C19基因多态性的引物探针组，其特征在于，所述探针3’末端标记阻抑聚合酶延伸或扩增的修饰基团；所述探针覆盖SNP位点，在探针的SNP位点上做锁核酸(LNA)修饰。

5.如权利要求4所述的一种基于锁核酸修饰的RMA法检测CYP2C19基因多态性的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括含扩增反应试剂A的检测管、含扩增反应试剂B的检测管、缓冲液、醋酸镁、阳性对照、阴性对照。