[发明专利]SPL3和miR156基因在鉴定抗从枝病泡桐的应用在审
| 申请号： | 202110227237.3 | 申请日： | 2021-03-01 |
| 公开（公告）号： | CN112941221A | 公开（公告）日： | 2021-06-11 |
| 发明（设计）人： | 范国强;翟晓巧;赵振利;王哲 | 申请（专利权）人： | 河南农业大学 |
| 主分类号： | C12Q1/6895 | 分类号： | C12Q1/6895;C12Q1/6851;C12N15/11 |
| 代理公司： | 北京慕达星云知识产权代理事务所(特殊普通合伙) 11465 | 代理人： | 崔自京 |
| 地址： | 450002*** | 国省代码： | 河南;41 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | spl3 mir156 基因 鉴定 泡桐 应用 | ||
1.SPL3和miR156基因在Real-Time PCR鉴定抗从枝病泡桐中的应用。
2.一种鉴定抗从枝病泡桐的引物，其特征在于，以SPL3和miR156基因进行鉴定，且所述引物序列如SEQ ID NO.1～SEQ ID NO.3所示；
miR156F-5P-qF：GACAGAAGATAGAGAGCACAA，如SEQ ID NO.1所示；
miR156F-5P-qR：GeneCopoeia公司的All-in-OneTMmiRNA qRT-PCR Detection Kit试剂盒配有下游通用引物Universal Adaptor PCR Primer；
pau-SPL3-qF:TTCTGTCATCTAACTCTTG，如SEQ ID NO.2所示；
pau-SPL3-qR:CCTCATCACTGGATTATAG，如SEQ ID NO.3所示。
3.一种抗丛枝病泡桐的早期分子鉴定方法，其特征在于，包括下述步骤：
(1)获取泡桐叶片：在同树龄泡桐样地，用高枝剪取待鉴定泡桐顶芽下部第一轮叶片；
(2)泡桐RNA抽提：采用研磨法提取泡桐叶片RNA，并用分光光度计评估RNA样品的纯度和浓度，最后纯化RNA样品，并将RNA保存在-80℃以备后用；
(3)合成cDNA：用SurescriptTMcDNA第一链合成试剂盒进行反转录反应，反应结束后，85℃灭活处理5min，-20℃保存反转录产物待用；
(4)SPL3和miR156表达量测定：分别以GAPDH和U6为内参基因，利用Real-Time PCR方法和权利要求2所述引物测定SPL3和miR156的相对表达量；
(5)表达量分析：参考(4)中测定出的SPL3和miR156的表达量，将高于SPL3的平均值、同时低于miR156的平均值的幼树认定为候选优株。
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