[发明专利]一种具有反转录酶活性的DNA聚合酶I大片段及其编码基因、制备方法和应用

权利要求书

1.一种具有反转录酶活性的DNA聚合酶I大片段，其氨基酸序列如序列表中序列1所示。

2.一种编码权利要求1所述具有反转录酶活性的DNA聚合酶I大片段的基因，其核苷酸序列如序列表中序列2所示。

3.含权利要求2所述基因的重组表达载体。

4.含权利要求3所述重组表达载体的重组菌。

5.根据权利要求4所述的重组菌，其特征在于，所述重组菌为大肠杆菌。

6.一种如权利要求1所述的具有反转录酶活性的DNA聚合酶I大片段的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

S1. 构建如权利要求3所述的重组表达载体；

S2. 将重组表达载体转入宿主细胞，并对宿主细胞进行扩大培养、诱导表达；

S3. 收集诱导培养后的菌体，进行破碎、加热、离心，得到上清液；

S4. 对上清液进行纯化，得到所述具有反转录酶活性的DNA聚合酶I大片段。

7.含权利要求1所述具有反转录酶活性的DNA聚合酶I大片段的反应体系，所述反应体系含50 mM Tris–HCl (pH 8.0)，50 mM KCl，2mM (NH₄)₂SO₄，2 mM MgCl₂，0.01% Triton X-100，0.005% BSA。

8.含权利要求1所述具有反转录酶活性的DNA聚合酶I大片段的反转录反应体系，所述反转录反应体系含50 mM Tris–HCl (pH 8.0)，50 mM KCl，2mM (NH₄)₂SO₄，2 mM MgCl₂，1mM DTT，0.01% Triton X-100，0.005% BSA。